瓊玉膏降低順鉑腎毒性的作用及可能機(jī)制的研究.pdf

1、背景:順鉑屬細(xì)胞周期非特異性藥物，可抑制癌細(xì)胞的DNA復(fù)制過(guò)程，具有廣譜抗腫痛作用，在臨床中常常用于多種實(shí)體瘤的化學(xué)治療或手術(shù)及放射治療后的輔助用藥。但是順鉑毒副作用大，其中腎臟毒性是最常見又嚴(yán)重的毒性反應(yīng)。目前在對(duì)抗順鉑腎毒性方面的研究越來(lái)越多，但至今沒有一個(gè)能解決順鉑腎毒性且不影響其療效的辦法應(yīng)用于臨床。瓊玉膏是一劑出自宋朝的經(jīng)典名方，具有滋陰壯水，補(bǔ)脾益氣等功效，主要用于肺虛癆咳，調(diào)理腸胃，延緩衰老，涉及到抗炎、抗氧化等藥理作用，

2、已有報(bào)道其與順鉑聯(lián)用可緩解順鉑腎毒性。鑒于此，瓊玉膏可能在順鉑引起的腎毒性方面具有一定的治療潛力。
　　目的:本課題主要目的在于通過(guò)在體實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)瓊玉膏對(duì)抗順鉑腎毒性的功效，并探索其初步的作用機(jī)制。
　　方法:(1)采用液質(zhì)聯(lián)用法對(duì)瓊玉膏進(jìn)行質(zhì)量控制研究，檢測(cè)其成分及含量。(2)將C57BL/6雄性小鼠隨機(jī)分為空白組（Control）、順鉑組(Cisplatin)、瓊玉膏+順鉑組（QYG+Cisplatin），Control和

3、Cisplatin兩組小鼠用生理鹽水(10ml/kg/day)灌胃10天，QYG+Cisplatin用QYG(14g/kg/day)灌胃10天，在灌胃第7天時(shí)，用單劑量順鉑溶液對(duì)Cisplatin和QYG+Cisplatin兩組小鼠進(jìn)行腹腔注射，劑量20 mg/kg。注射順鉑72h后收樣，摘除眼球法取血，收集小鼠兩側(cè)腎臟。根據(jù)肌酐、尿素氮檢測(cè)試劑盒說(shuō)明及H&E染色法評(píng)價(jià)各組小鼠腎臟腎功能。(3)采用電感耦合發(fā)光質(zhì)譜法和免疫組化法檢測(cè)小鼠

4、組織和尿液中pt+含量及Ctr1和OCT2的含量評(píng)價(jià)各組小鼠對(duì)順鉑轉(zhuǎn)運(yùn)功能;采用TUNEL染色法和免疫組化法、Western bloting檢測(cè)法以及qPCR法檢測(cè)小鼠腎組織細(xì)胞凋亡和增殖情況以及PCNA和p53的蛋白表達(dá)，并且根據(jù)各組小鼠炎癥因子COX-2、IL-1β、TNF-α的mRAN的相對(duì)表達(dá)量來(lái)反應(yīng)小鼠腎臟組織炎癥反應(yīng)水平。(4)建立Lewis荷痛小鼠模型，將小鼠隨機(jī)分為空白組（Control）、模型組(Model)、順鉑組(

5、Cisplatin)、瓊玉膏組(QYG)和聯(lián)合用藥組(QYG+Cisplatin)。正常組和模型組每日生理鹽水灌胃，每只小鼠每日灌胃10ml/kg，瓊玉膏組每日瓊玉膏灌胃，劑量14g/kg;順鉑組腹腔注射順鉑溶液，劑量2 mg/kg，隔日一次，共3次;順鉑+瓊玉膏組腹腔注射順鉑溶液，劑量2 mg/kg，隔日一次，共3次，同時(shí)每日以瓊玉膏灌胃，劑量14g/kg。對(duì)荷痛小鼠的腫痛體積進(jìn)行測(cè)量并記錄小鼠死亡情況來(lái)評(píng)價(jià)瓊玉膏對(duì)荷痛小鼠腫痛生長(zhǎng)情

6、況和存活時(shí)間的影響。
　　結(jié)果:(1)采用液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)出瓊玉膏中21種化合物及其分子結(jié)構(gòu)式，并得出其巾13巾化合物的含量;(2)給予順鉑(20 mg/kg)后，小鼠的體重下降，血清尿素氮和肌酐值上升（尿素氮水平從9.87±1.27mmol/L上升至15.34±2.47mmol/L，肌酐水平從16.08±1.05μmol/L上升至31.14±1.81μmol/L)，H&E染色顯示，小鼠的腎臟組織損傷嚴(yán)重，并有伴隨大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。

7、而用瓊玉膏預(yù)防用藥的小鼠腎小管及腎小球形態(tài)比較清晰，無(wú)可見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，可以緩解腎臟組織損傷，血清尿素氮和肌酐值顯著低于順鉑組(尿素氮水平為10.28±3.08mmol/L，肌酐水平為21.01±6.08μmol/L);(3)與順鉑組小鼠相比，瓊玉膏可以降低pt+在腎臟的蓄積，下調(diào)Ctr1和OCT2的表達(dá)量，減少腎小管細(xì)胞的凋亡，降低p53的表達(dá)，促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞的增殖，降低炎癥因子TNF-α、COX-2、IL-1β mRNA的相對(duì)表