微小隱孢子蟲初生犢牛感染試驗(yàn)及分子遺傳特性分析研究.pdf

1、隱孢子蟲病(Cryptosporidiosis)是一種全球性的人獸共患寄生蟲病，感染廣泛的脊椎動物宿主。本試驗(yàn)對河南某地區(qū)奶牛隱孢子蟲病流行情況作了深入調(diào)查，通過對部分牛源隱孢子蟲分離株從卵囊形態(tài)學(xué)、動物感染試驗(yàn)、卵囊排出規(guī)律、核糖體小亞基(18SrRNA)基因和PCR-RFLP分析及生物學(xué)特性研究，分析鑒定出河南省部分地區(qū)牛源隱孢子蟲流行種類和基因型，確定了該地區(qū)牛源隱孢子蟲分離株和其它種類隱孢子蟲之間的分子種系進(jìn)化關(guān)系，為預(yù)防和治療

2、人獸共患隱孢子蟲病提供了理論依據(jù)。
　　 為了解奶牛腸道寄生蟲病的流行情況，尤其是人獸共患腸道寄生蟲流行情況，采用盧戈氏碘液染色法、飽和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法對商丘地區(qū)兩個奶牛養(yǎng)殖場共154份新鮮糞便進(jìn)行調(diào)查。結(jié)果發(fā)現(xiàn)115份樣品為陽性樣品，總感染率為74.68％(115/154)；其中賈第蟲感染率為7.14%(11/154)；隱孢子蟲感染率為10.39%(16/154)；球蟲感染率為66.23%(102/154)；圓線

3、蟲感染率為3.24%(5/154)；毛首線蟲感染率為5.19%(8/154)。本次調(diào)查為臨床治療和預(yù)防奶牛腸道寄生蟲病提供了參考和依據(jù)。
　　 為建立牛源C.parvum隱孢子蟲初生犢牛動物模型，將牛源C.parvum卵囊用導(dǎo)管灌胃接種一頭3日齡未吃初乳的荷斯坦公犢牛，對排卵囊規(guī)律，臨床表現(xiàn)進(jìn)行觀察。試驗(yàn)結(jié)果顯示潛隱期為2天，高峰排卵囊期出現(xiàn)在感染后第5d，高峰期持續(xù)6d。對病牛剖檢后刮取消化道黏膜涂片經(jīng)改良抗酸染色，結(jié)果僅在小

4、腸中段發(fā)現(xiàn)卵囊。C.parvum寄生于牛的小腸。本試驗(yàn)成功感染犢牛，建立了C.parvum動物模型。
　　 為了解河南省部分地區(qū)奶牛隱孢子蟲感染率及評估奶牛在隱孢子蟲人獸共患傳播中的作用。本研究參考1999年，Xiao等建立的方法，對試驗(yàn)二斷奶前犢牛鏡檢陽性樣品進(jìn)一步用巢式PCR擴(kuò)增進(jìn)行18SrRNA基因擴(kuò)增，擴(kuò)增片段經(jīng)測序和序列比對。用VspI和SspI酶切該片段，兩個酶切圖譜顯示牛源隱孢子蟲與牛源C. parvum酶切后的圖

5、譜相同，明顯區(qū)別于C. bailyei。系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果顯示，隱孢子蟲蟲種形成了2個群，1群包括C. serpentis、C. andersoni和C. muris。另一個群包括C. bailyei、C. bovis、C.ryanae、C. meleagridis、C. hominis、C. parvum以及本研究中的2個分離株，2個犢牛分離株和C. parvum處于同一分類單位。本研究表明，該地區(qū)奶牛可能在隱孢子蟲的人獸共患傳播中起一