上海一株豬源隱孢子蟲的蟲種鑒定及遵義市人畜隱孢子蟲感染的初步調(diào)查.pdf

1、目的:1、選擇一種高效、簡潔快速、價格合理的糞便微量DNA提取試劑盒。2、上海一株豬源隱孢子蟲的蟲種鑒定。3、初步了解遵義部分腹瀉兒童、腫瘤病人及家畜的隱孢子蟲感染情況及其流行特征。
　　 方法:1、用三種不同的試劑盒提取糞便DNA,通過比較所提取DNA的濃度、純度、提取率及巢式PCR產(chǎn)物等評價三種糞便微量DNA提取試劑盒。2、上海一份豬糞樣品經(jīng)改良-抗酸染色確定隱孢子蟲感染,測量卵囊大小;提取DNA后經(jīng)18SrRNA基因巢式P

2、CR擴增,擴增產(chǎn)物測序后用Blast和MEGA軟件進行同源性和系統(tǒng)發(fā)育分析。3、采集遵義醫(yī)學院附院兒科腹瀉患者及腫瘤科病人、周邊鄉(xiāng)鎮(zhèn)狗、牛、豬糞便標本共582份,改良抗酸染色檢測隱孢子蟲卵囊,所有樣本提取DNA后經(jīng)18SrRNA基因巢式PCR擴增。
　　 結果:1、Genmed試劑盒提取的DNA濃度最高、PCR產(chǎn)物條帶最亮,但提取時間相對過長,價格相對過高。天根試劑盒提取的DNA純度最高,DNA濃度及價格適中,提取時間最短。碧云

3、天試劑盒提取的DNA純度、濃度均不高且提取時間最長,但價格最便宜。2、上海豬糞樣品經(jīng)改良-抗酸染色后卵囊呈玫瑰紅色、圓形,其大小為(4.90±0.83)μm×(4.52±0.73)μm;通過18SrRNA基因分析,上海豬源隱孢子蟲與巴西-株隱孢子蟲豬基因型Ⅱ(Cryptosporidiumsp.piggenotypeⅡ)同源性為100％,種系發(fā)育樹上兩者在同一分支。3、遵義采集的所有人畜糞便標本經(jīng)改良抗酸染色,顯微鏡觀察均未發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲