中國(guó)株J亞群禽白血病病毒全基因組序列的測(cè)定與分析.pdf

1、該研究共進(jìn)行了三個(gè)試驗(yàn).試驗(yàn)1,運(yùn)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction PCR)方法擴(kuò)增并克隆了在中國(guó)分離得到的反轉(zhuǎn)錄病毒J亞群禽白血病病毒NX0101株的前病毒全基因組序列并完成了序列測(cè)定,并與已發(fā)表的ALV-J前病毒序列進(jìn)行比較.根據(jù)已報(bào)道的ALV-J前病毒基因組序列設(shè)計(jì)了8對(duì)重疊引物,通過(guò)PCR方法擴(kuò)增出ALV-J/NX0101株的不同cDNA片段,分別克隆到pMD18-T載體中,轉(zhuǎn)化受體菌TG1,

2、酶切鑒定陽(yáng)性克隆,并對(duì)陽(yáng)性克隆測(cè)序,最后拼接出NX0101株的全基因組核酸序列.試驗(yàn)2,探索了對(duì)REV特異性的雜交瘤細(xì)胞株11B154的最佳生長(zhǎng)和抗體分泌條件.以每毫升培養(yǎng)液中平均含0.65×10<'6>個(gè)/ml活細(xì)胞起始,于37℃下在含7％CO<,2>的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng).在24、48、72和96小時(shí)后,每毫升培養(yǎng)液平均總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞數(shù)(百分比)分別是:1.13×10<'6>和1.03×10<'6>(活細(xì)胞占94.5％)、3.42×1

3、0<'6>和2.48×10<'6>(活細(xì)胞占72.5％)、2.6×10<'6>和0.98×10<'6>(活細(xì)胞占37.7％)及2.47×10<'6>和0.53×10<6>(或細(xì)胞占21.5％).同時(shí)用細(xì)胞培養(yǎng)上清液對(duì)REV感染的雞胚成纖維細(xì)胞作間接熒光抗體試驗(yàn),在培養(yǎng)24、48、72和96小時(shí)后上清液中平均抗體效價(jià)分別是1:67、1:133、1:67及1:33.試驗(yàn)3,為了模仿REV垂直感染雞胚,在1和3日齡的發(fā)育SPF雞胚人工接種不同