星形膠質細胞中CDK5磷酸化BAG3的作用與機制研究.pdf

1、細胞周期素依賴性蛋白激酶5(Cyclin-Dependent Kinase5，CDK5)是細胞周期蛋白依賴性絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族中的一個成員，在神經系統(tǒng)的發(fā)育中發(fā)揮了至關重要的作用。CDK5的調節(jié)亞基P35、P39是神經系統(tǒng)特異性表達的蛋白，因此賦予了CDK5在神經系統(tǒng)中特異的激酶活性，使CDK5在調控神經遞質傳遞，神經元凋亡等方面發(fā)揮了重要作用。對于CDK5的研究一直集中在對其新底物的發(fā)現和鑒定上，至今為止有40余個CDK5的底

2、物被鑒定出來。作為脯氨酸依賴性蛋白激酶，CDK5可以特異磷酸化包含有(S/T)PX(H/K/R)序列的底物蛋白，其中S/T代表絲氨酸/蘇氨酸，X代表任意氨基酸，P代表脯氨酸。
　　BAG3是共分子伴侶BAG家族的一個主要成員，作為一個抗凋亡蛋白，BAG3通過其BAG(110-124位氨基酸)結構域和Bcl-2以及熱休克蛋白70（Hsp-70）的ATPase結構域結合增加其抗凋亡活性。作為一個保守蛋白，BAG3參與調控了多種重要的生

3、物功能，包括:凋亡，發(fā)育，細胞骨架形成，自噬以及抵抗外界壓力等。BAG3除了在心肌細胞及骨骼肌細胞高表達以外，在神經系統(tǒng)中的大腦皮層以及海馬區(qū)也有表達，并且在發(fā)育過程中，在腦干以及脊髓的早期發(fā)育中也有表達。之前對于BAG3的研究大多數集中在癌癥方面，而BAG3對神經系統(tǒng)的功能影響還相對較少。本論文著重在神經系統(tǒng)中對于神經元功能起重要支撐作用的膠質細胞中，研究探討CDK5-BAG3信號通路對膠質細胞的作用及其功能影響。
　　我們通過

4、研究發(fā)現，BAG3的S291位點可以被CDK5磷酸化。BAG3的S291位點被磷酸化之后，其蛋白質穩(wěn)定性明顯升高;同時BAG3與抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的相互作用明顯降低。但對其亞細胞定位以及與Hsp-70的相互作用卻沒有改變。在中樞神經系統(tǒng)的各種神經細胞類型中，BAG3在膠質細胞中的表達量最高。我們通過原代膠質細胞、膠質瘤細胞系、膠質瘤等體系，通過不同神經毒性刺激來模擬神經退行性等疾病過程中膠質細胞的功能改變。在這其中探討CDK5異常