CDK5磷酸化Raf激酶抑制蛋白在帕金森病中的研究進(jìn)展.pdf

1、隨著人口老齡化的加重,神經(jīng)退行性疾病得到了越來(lái)越多的重視。在包括阿爾茲海默式癥(Alzheimer’s disease,AD)、帕金森病(Parkinson’s disease,PD)及亨廷頓病(Huntinton’s disease,HD)等的多種神經(jīng)退行性疾病中,神經(jīng)元的過(guò)度死亡是疾病的共同表現(xiàn),也是出現(xiàn)多種神經(jīng)系統(tǒng)病理癥狀的主要原因。神經(jīng)退行性疾病中關(guān)于神經(jīng)元死亡增多的機(jī)制研究已經(jīng)獲得了一些結(jié)論,但在分子機(jī)制方面仍有許多問(wèn)題尚未得

2、到回答。在研究神經(jīng)元死亡機(jī)制的過(guò)程中,神經(jīng)元細(xì)胞周期再進(jìn)入(cell cycle re-entry)這一概念的重要性逐漸浮現(xiàn)出來(lái)。細(xì)胞周期是可分裂細(xì)胞維持其生長(zhǎng)與增殖狀態(tài)的重要生理事件,但成熟神經(jīng)元是無(wú)法進(jìn)入細(xì)胞周期的。當(dāng)神經(jīng)元在病理狀態(tài)下進(jìn)入了細(xì)胞周期時(shí),即被稱為細(xì)胞周期再進(jìn)入。神經(jīng)元無(wú)法通過(guò)細(xì)胞周期來(lái)進(jìn)行分裂,因此細(xì)胞周期再進(jìn)入后可直接通過(guò)凋亡相關(guān)的分子機(jī)制來(lái)介導(dǎo)神經(jīng)元發(fā)生死亡。
　　細(xì)胞周期的運(yùn)行受到多條信號(hào)通路的調(diào)控,而絲

3、裂原激活的激酶信號(hào)通路(ERK/MAPK cascade)是其中的重要部分。在可增殖細(xì)胞中,ERK/MAPK通路主要介導(dǎo)了細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期以及紡錘體形成等過(guò)程;而對(duì)神經(jīng)元來(lái)說(shuō),進(jìn)入S期即代表發(fā)生了細(xì)胞周期再進(jìn)入,細(xì)胞會(huì)難以避免地走向死亡。因此,研究ERK/MAPK通路的活性調(diào)控對(duì)研究神經(jīng)元的細(xì)胞周期及死亡是具有重要意義的。
　　在關(guān)注ERK通路活性時(shí),我們將Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor prot

4、ein,RKIP)作為目的分子,后者是ERK通路的生理性抑制因子,通過(guò)結(jié)合并抑制Raf-1活性來(lái)發(fā)揮作用。RKIP表達(dá)的下調(diào)已被證實(shí)參與多種惡性腫瘤發(fā)生與發(fā)展過(guò)程,但其下調(diào)的分子機(jī)制尚不明確。RKIP在腦組織中高表達(dá),但在神經(jīng)系統(tǒng)及神經(jīng)退行性疾病中的作用也報(bào)道不多。
　　為了研究RKIP蛋白影響ERK通路活性的方式,我們又注意到另一個(gè)重要分子,細(xì)胞周期素依賴性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase 5,CDK5

5、)。CDK5的活性呈神經(jīng)系統(tǒng)特異性分布,通過(guò)磷酸化多種底物來(lái)調(diào)控神經(jīng)元的發(fā)育、軸突導(dǎo)向、突觸形成、遷移等多種重要事件。因此,本論文擬以帕金森病為神經(jīng)退行性疾病模型,研究在其病變過(guò)程中,CDK5對(duì)RKIP蛋白是否存在調(diào)節(jié)作用,以及該調(diào)節(jié)機(jī)制是否對(duì)ERK/MAPK通路的活性和多巴胺能神經(jīng)元存活的情況產(chǎn)生影響。
　　本文首先在體外和細(xì)胞水平驗(yàn)證了RKIP蛋白是CDK5的磷酸化底物,且磷酸化RKIP與Raf-1的結(jié)合能力顯著低于未磷酸化時(shí)

6、,表明RKIP的T42位磷酸化可介導(dǎo)RKIP與Raf-1解離。一方面,磷酸化修飾可以誘導(dǎo)RKIP蛋白自身通過(guò)分子伴侶介導(dǎo)的自噬途徑(chaperone-mediated autophagy,CMA)降解,且RKIP序列中的“179KLYEQ183”結(jié)構(gòu)域是CMA的作用靶點(diǎn),由分子伴侶Hsc70識(shí)別并結(jié)合該結(jié)構(gòu)域,并將RKIP攜帶至溶酶體進(jìn)行降解。另一方面,在與磷酸化RKIP解離后,Raf-1的激酶活性得到解放,對(duì)神經(jīng)元的檢測(cè)表明此時(shí)磷酸

7、化MEK、磷酸化ERK的表達(dá)都上調(diào),說(shuō)明ERK通路下游信號(hào)出現(xiàn)了級(jí)聯(lián)式激活,并最終會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞學(xué)效應(yīng)。
　　接下來(lái),實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明ERK通路激活時(shí),進(jìn)入S期的神經(jīng)元數(shù)量增多,表明出現(xiàn)了細(xì)胞周期再進(jìn)入現(xiàn)象。此時(shí),神經(jīng)元也出現(xiàn)了死亡增多,而抑制CDK5活性或ERK通路活性均對(duì)神經(jīng)元有保護(hù)作用,表明細(xì)胞周期再進(jìn)入現(xiàn)象參與介導(dǎo)了神經(jīng)元的死亡。在帕金森病的神經(jīng)元模型中,我們同樣發(fā)現(xiàn)多巴胺能神經(jīng)元也會(huì)出現(xiàn)RKIP磷酸化增強(qiáng)、ERK通路激活相關(guān)的細(xì)

8、胞周期再進(jìn)入,以及繼發(fā)的神經(jīng)元死亡。最后,無(wú)論是MPTP誘導(dǎo)的還是轉(zhuǎn)基因的帕金森病模型鼠,其中腦組織都出現(xiàn)了RKIP磷酸化水平上調(diào),ERK通路過(guò)度激活,且在老年P(guān)D鼠中存在明顯的RKIP水平降低。這些結(jié)果表明,RKIP磷酸化介導(dǎo)的ERK通路激活導(dǎo)致了多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞周期再進(jìn)入,并參與了神經(jīng)元死亡的過(guò)程。
　　帕金森病中神經(jīng)元的死亡機(jī)制一直受到關(guān)注,而此處我們以RKIP這一分子為線索,將CDK5激酶、ERK/MAPK通路、自噬途徑