紅豆杉中與異戊二烯代謝途徑相關的AP2類轉錄調控因子的克隆與功能研究.pdf

1、紅豆杉中與異戊二烯代謝途徑相關的A P 2 類轉錄調控因子的克隆與功能研究M o l e c u l a r C l o n i n ga n d C h a r a c t e r i z a t i o n o f A P 2 - —T y p eT r a n s c r i p t i o n F a c t o r s I n v o l v e di nI s o p r e n o i d B i o s y n t h

2、e t i cP a t h w a y o f T a x u s c u s p i d a t a復旦大學生命科學學院，遺傳學研究所，遺傳工程國家重點實驗室復旦一交大一諾丁漢植物生物技術研發(fā)中心上海市邯鄲路2 2 0 號，中國，2 0 0 4 3 3S t a t eK e y L a b o r a t o r y o f G e n e t i c E n g i n e e r i n g ，I n s t i t u t

3、e o f G e n e t i c s ，F(xiàn) u d a n ．S J T U - N o t t i n g h a m P l a n tB i o t e c l m o l o g yR & D C e n t e rS c h o o l o f L i f eS c i e n c e s ，F(xiàn) u d a n U n i v e r s i t y2 2 0 H a n d a n R o a d , S h

4、a n g h a i ，P ．R ．C h i n a 2 0 0 4 3 3戴怡齡指導小組： 唐克軒教授 楊金水教授 沈大棱教授2 0 0 8 ．4 ．1 52 ．3 酵母單雜交系統(tǒng)的建立????????????????????．．4 72 ．4 酵母文庫的篩選????????????????????????．4 82 ．5 篩選獲得的p u t a t i v e 轉錄因子片段????????????????5 12 ．6 東北紅

5、豆杉A P 2 轉錄因子基因全長c D N A 的獲得及分析?????．．5 22 ．7 T c A P 2 基因的分子進化分析??????????????????5 72 ．8 T c A P 2 的二維結構分析????????????????????．6 l2 ．9 T c A P 2 的D N A 結合域結構分析?????????????????6 22 ．1 0T c A P 2 三維結構及功能域的預測與分析??????????

6、?????．6 32 ．1l T c A _ P 2 基因的S o u t h e r n b l o t 分析?????????????????6 43d 、結????????????????????????????????????????。6 5第三章東北紅豆杉中與異戊二烯代謝途徑相關的T c D R E B 轉錄因子基因的克隆?．．????．?????．???????．．．?????．??????．??．?????．??．???．

7、6 7l 材料與準備????????????????????????????6 71 ．1 植物材料及誘導???????????????????????6 71 ．2 菌株和載體???????????????????????????6 71 ．3 酶與試劑盒??????????????????????????．6 71 ．4 引物?????????????????????????????????????6 72 方法??????????

8、??????????????????????????????。6 82 ．1 東北紅豆杉總R N A 的抽提及質量檢測?????????????．6 82 ．2 東北紅豆杉總D N A 的抽提及質量檢測??????????????6 82 ．3 D N A 片段的回收、連接、克隆和測序?????????????．6 82 ．4 T c D R E B 目的基因的克隆???????????????????。6 82 ．5 T c D R

9、E B 基因的S o u t h e m b l o t t i n g 分析???????????????6 92 ．6 生物信息學分析????????????????????????6 93 結果與討論????????????????????????????7 03 ．1 T c D R E B 全長e D N A 的獲得及分析???????????????．7 03 ．2 T c D R E B 編碼區(qū)推導的蛋白序列性質分析???

10、?????????．7 l3 ．3 T c D R E B 轉錄因子的葉綠體前導肽分析??????????????．．7 33 ．4 T c D R E BH o m o l o g 的序列比對和分析????????????????7 33 ．5 T c D R E B 的分子進化分析????????????????????．7 43 ．6 T e D R E B 的二維結構和拓撲學結構分析?????????????7 53 ．7 T