琯溪蜜柚黑斑病菌的生理特性及綠色熒光蛋白標(biāo)記.pdf

1、本文從琯溪蜜柚黑斑病菌Phyllosticta citriasiana的生長(zhǎng)特性、寄主范圍、代謝活性組分、遺傳轉(zhuǎn)化及綠色熒光蛋白標(biāo)記等內(nèi)容進(jìn)行研究，取得結(jié)果如下：
　　P. citriasiana菌絲生長(zhǎng)對(duì)溫度敏感，人工培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)溫度≥40℃或≤10℃時(shí)，菌絲生長(zhǎng)完全受抑制。培養(yǎng)溫度在15℃-35℃之間，菌絲生長(zhǎng)速率呈現(xiàn)先增長(zhǎng)后驟降的趨勢(shì)，在培養(yǎng)溫度為25℃時(shí)菌絲生長(zhǎng)速率最快，7d的菌落直徑達(dá)3.41cm，30℃次之（3.2

2、5cm），它們與15℃（1.29cm）、20℃(1.49cm)和35℃(0.68cm)的生長(zhǎng)速率存在顯著差異，表明25-30℃較適宜該菌菌絲生長(zhǎng)。菌絲在SOA培養(yǎng)基生長(zhǎng)速率最快（9d），與在 OA培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速率存在顯著差異，OA培養(yǎng)基上添加2％的山梨醇可以促進(jìn)菌絲的生長(zhǎng)。菌絲生長(zhǎng)對(duì)光照強(qiáng)度敏感，光照強(qiáng)度為0 Lux（黑暗條件）時(shí)生長(zhǎng)速率最快，而光照強(qiáng)度為1980 Lux條件下的生長(zhǎng)速率顯著降低。P. citriasiana分生孢子在

3、1%葡萄糖溶液、10%葡萄糖溶液和水中的萌發(fā)率隨著萌發(fā)時(shí)間的延長(zhǎng)（0-72h），萌發(fā)率先升高后降低，在萌發(fā)48h時(shí)，萌發(fā)率最高，分別為61.4%、39.1%、52.7%。在水中添加1%或10%的葡萄糖，能使分生孢子24h的萌發(fā)率顯著提高，但在水中萌發(fā)48h的萌發(fā)率與在1%葡萄糖中萌發(fā)48h的萌發(fā)率差異不顯著，表明1%或10%葡萄糖溶液僅在短時(shí)間內(nèi)促進(jìn)P. citriasiana分生孢子萌發(fā)。分生孢子在0.7M NaCl溶液中的萌發(fā)率低，

4、最大值僅為16.4%（72h內(nèi)）。菌絲和分生孢子的致死溫度為≥55℃水浴15min。
　　P. citriasiana對(duì)柑橘屬28份植物的致病性測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，P. citriasiana的致病譜比較窄，除了能侵染琯溪蜜柚外，還可以侵染柚子中的龍柚1號(hào)、龍柚2號(hào)、葡萄柚、坪山柚，以及檸檬中的費(fèi)米耐勞白花2號(hào)檸檬、五峰2號(hào)檸檬和海南藥用檸檬。
　　P. citriasiana菌絲的培養(yǎng)濾液對(duì)琯溪蜜柚葉片具有生物活性，在刺傷部位形

5、成黃褐色斑，類似于P. citriasiana侵染的發(fā)病癥狀。培養(yǎng)濾液的活性組分較耐高溫，在80℃水浴處理15min后，仍對(duì)琯溪蜜柚葉片具有生物活性。將濾液通過直接減壓濃縮或乙酸乙酯萃取濃縮，甲醇溶解過濾后，均在367nm處具有較強(qiáng)的紫外吸收峰。濃縮物經(jīng)無(wú)菌水溶解后，能使刺傷的鵝絨藤Cynanchum chinense葉片形成黃黑色斑，而對(duì)刺傷的勝紅薊Ageratum conyzoides葉片無(wú)生物活性。
　　P. citrias

6、iana菌絲在CM、SCM和0.6M TB-Sucrose液體培養(yǎng)基上，25℃、120rpm條件下振蕩培養(yǎng)3d，可形成鮮白或黃白的菌絲團(tuán)或菌絲球。單獨(dú)使用裂解酶或崩潰酶裂解菌絲形成的原生質(zhì)體較少，分別用35mg/mL裂解酶和10mg/mL崩潰酶裂解菌絲3h，形成的原生質(zhì)體濃度低，僅為8.167×105個(gè)/mL和1.0×105個(gè)/mL。而用30mg/mL裂解酶+15mg/mL崩潰酶能取得最佳的裂解效果，形成的原生質(zhì)體濃度達(dá)1.24×107