噬菌體Bp7尾絲蛋白gp37和gp38在宿主識別過程中的作用及其受體鑒定.pdf

1、有尾噬菌體侵染細菌首先利用尾絲蛋白與宿主細胞表面受體結合，進而啟動侵染過程。本研究以肌尾噬菌體Bp7尾絲蛋白gp37和gp38為研究對象，探索其尾絲蛋白gp37和gp38在宿主識別過程中發(fā)揮的作用。具體內容包括以下三個方面：
　?。?）尾絲蛋白gp37和gp38的生物信息學分析及原核表達。利用分子生物學軟件對尾絲蛋白 gp37和gp38進行氨基酸序列同源性分析，結果發(fā)現尾絲蛋白gp37和gp38都與T2噬菌體親緣關系較近，與T4噬

2、菌體親緣關系很遠。對尾絲蛋白gp37和gp38之間的連接序列分析發(fā)現二者之間存在核糖體結合位點，暗示gp38可能與gp37在尾絲上相鄰排列，是噬菌體Bp7的結構蛋白。以噬菌體Bp7基因組為模板，PCR擴增噬菌體Bp7尾絲蛋白gp37和gp38基因序列，以pcoldTF為載體，構建pcoldTF-gp37和pcoldTF-gp38重組表達質粒，在E.coli BL21（DE3）中，IPTG誘導表達目的蛋白，并進行SDS-PAGE及West

3、ern-blot鑒定。pcoldTF為載體的兩個尾絲蛋白實現可溶性表達，親和層析純化蛋白，免疫家兔，分別制備尾絲蛋白gp37和gp38的多克隆抗體，用于后期試驗。
　　（2）尾絲蛋白gp37和gp38在宿主識別過程中的作用。通過免疫電鏡試驗，證實尾絲蛋白gp38作為結構蛋白位于噬菌體的長尾絲上。通過尾絲蛋白競爭吸附試驗和抗體阻斷試驗發(fā)現，尾絲蛋白gp38及其抗血清能夠完全抑制噬菌體對宿主菌的吸附作用，而gp37的抗血清不能抑制噬菌

4、體吸附宿主菌，表明尾絲蛋白gp38位于噬菌體Bp7的長尾絲末端，在宿主識別過程中發(fā)揮重要作用。
　?。?）噬菌體Bp7識別受體的篩選與鑒定。利用醋酸鈉和蛋白酶K分別處理宿主菌E.coli K12，與未處理的對照組比較，噬菌體Bp7的吸附率分別下降25％和10%，表明噬菌體Bp7識別的受體種類包括脂多糖和蛋白類，脂多糖為其主要的識別受體，膜蛋白為其次要受體。熱-酚水法提取 E.coli K12脂多糖，進行阻斷試驗，結果表明噬菌體 B