斑點叉尾鮰天然單鏈噬菌體抗體庫的構建及初步鑒定.pdf

1、抗體在生物學研究中具有重要作用,噬菌體抗體庫技術的發(fā)現使得抗體的制備更方便。抗體庫技術在水生生物方面的研究應用上基本還是空白,本文對構建斑點叉尾鮰天然單鏈噬菌體抗體庫進行了研究。
　　 本研究采用未經免疫過的斑點叉尾鮰,從其淋巴細胞胞提取RNA,RT-PCR擴增出抗體重鏈可變區(qū)VH和輕鏈可變區(qū)VL基因,純化回收的VH與VL,先采用含有Linker片段的引物將Linker片段連接到VL基因段上去,然后與VH片段組裝成單鏈抗體基因(

2、ScFv).
　　 ScFv基因片段經過帶有限制性內切酶位點SfiI、NotI的引物擴增,獲得約1300bp的目的片段。純化后該片段后再分別進行SfiI、NotI消化,并與經過SfiI、Nofl雙酶切的載體pCANTAB-5E連接,電轉化大腸桿菌感受態(tài)細胞。轉化菌經輔助噬菌體VCSM13作用后,得到斑點叉尾鮰天然單鏈噬菌體抗體庫。提取質粒通過PCR鑒定,證明有外源片段插入,并測定其庫容為5.8×105,說明建庫成功。
　　

3、 在成功構建了斑點叉尾鮰天然單鏈噬菌體抗體庫的基礎上,我們以OVA—SMZ為抗原對所構建的斑點叉尾鮰天然單鏈噬菌體抗體庫進行了三輪“吸附-擴增-洗脫”的富集篩選過程,并獲得了OVA—SMZ的次級噬菌體抗體庫。從抗體庫中選取單個菌落制備成噬菌體抗體,對其進行ELISA鑒定,得到預期結果,再次證明建庫成功。
　　 本研究的完成,一方面為抗體制備及新型生物制品的研究探索了新的途徑,有重要意義；另一方面,為以水生生物的疾病診治、藥物殘