小膠質細胞Hv1促進慢性低灌注白質損傷及其機制研究.pdf

1、目的：電壓-門控質子通道，即 Hv1，對質子具有高度選擇性，對 NADPH氧化酶依賴的活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產生是非常必要的，在中樞神經系統(tǒng)特異性和功能性表達在小膠質細胞。而小膠質細胞作為中樞神經系統(tǒng)的免疫細胞，其M1, M2分型對白質的損傷，再生，修復具有非常重要的作用。M1型小膠質細胞大量產生ROS,而Hv1-/-小膠質細胞ROS大量減少，那么Hv1-/-對小膠質細胞的分型是否有影響，是否

2、能夠對白質損傷有保護性作用呢？
　　方法：用雙側頸總動脈狹窄（bilateral common carotid artery stenosis, BCAS）建立慢性低灌注腦白質損傷所致血管性認知功能障礙小鼠模型。免疫熒光檢測髓鞘堿性蛋白MBP,髓鞘糖蛋白 MAG,去磷酸化神經絲 Smi32，神經絲重鏈蛋白 NF200,在小鼠BCAS模型后表達量的改變。免疫熒光雙標少突膠質細胞上的Nfasc155和軸突上的caspr蛋白觀察朗飛節(jié)側

3、區(qū)隔板樣結構；熒光雙標Nav1.6和caspr觀察朗飛節(jié)區(qū)Nav1.6通道長度的改變。免疫熒光雙標CD16/32和Iba1計數(shù)野生型（wild type,WT）和Hv1-/-型小鼠Sham組及BCAS組M1型小膠質細胞數(shù)目；免疫熒光雙標CD206和Iba1計數(shù)上述分組 M2型小膠質細胞數(shù)目。體外培養(yǎng) WT和 Hv1-/-小鼠的小膠質細胞，用LPS+IFNγ或者IL-4誘導細胞轉化為M1型或者M2型，qPCR檢測CD16/32, iNOS

4、, TNFα; CD206, Arg1，CCL22等指標mRNA表達變化，Western Blot技術檢測iNOS, CD16/32, CD206, Arg1蛋白表達變化。八臂迷宮檢測小鼠行為學的改變。
　　結果：在模型組Nfasc155和caspr共定位系數(shù)降低，MAG表達明顯減少，說明BCAS術后出現(xiàn)軸突膠質微結構的破壞；Smi32表達升高，而NF表達無明顯變化，說明胼胝體中軸突纖維出現(xiàn)去磷酸化，輕微受損；BCAS模型后，與

5、Sham組相比，Hv1-/-組共定位系數(shù)較高，MAG蛋白表達也多，Smi32表達減少，說明Hv1敲除對慢性低灌注導致的損傷有保護性作用；八臂迷宮行為學顯示H v1-/-模型組小鼠認知能力明顯好于WT模型組；BCAS模型后，通過胼胝體的CD16/32與Iba1雙標顯示Hv1-/-組的M1型小膠質細胞數(shù)量明顯少于WT組，而CD206與Iba1雙標顯示Hv1-/-組的M2型小膠質細胞數(shù)量明顯多于 WT組；體外小膠質細胞培養(yǎng)誘導成 M1, M2

6、型，檢測mRNA表達水平及WB檢測蛋白表達結果顯示相對WT組，Hv1-/-小膠質細胞CD16/32,iNOS等M1標志物表達水平下降，CD206, Arg1等M2標志物表達水平升高；體內外的結果顯示Hv1基因敲除有助于小膠質細胞從M1型向M2型轉化，從而實現(xiàn)對BCAS模型中脫髓鞘病理改變的保護作用。
　　結論：相較于野生型C57模型組小鼠，Hv1-/-模型組小鼠在分子細胞水平和行為學水平均顯示出對白質損傷的保護作用。一系列體內外實