Annexin-1促進小膠質(zhì)細胞M2型轉(zhuǎn)換保護缺血損傷神經(jīng)元的機制研究.pdf

1、目的:以體外培養(yǎng)的原代小膠質(zhì)細胞或者BV-2細胞系為研究對象,探討Annexin-1-nFPRs通路對小膠質(zhì)細胞表型和遷移能力的影響,研究Annexin-1-nFPRs通路對缺血損傷神經(jīng)元的保護作用及機制。
　　方法:采用RT-PCR法和Western blot法從基因和蛋白水平檢測Annexin-1和nFPRs在哪些細胞上表達;采用鈣成像方法檢測小膠質(zhì)細胞的胞內(nèi)鈣濃度變化;采用Western blot法檢測小膠質(zhì)細胞的Annex

2、in-1,Iba-1,nFPRs,arginase-1,HA蛋白的表達水平;采用MTT法檢測神經(jīng)元的活力;采用ELISA法檢測原代小膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元共培養(yǎng)體系中的炎性因子和營養(yǎng)因子的釋放;采用Transwell小室檢測小膠質(zhì)細胞的遷移數(shù)目。
　　結(jié)果:1.Annexin-1保守地表達于小膠質(zhì)細胞,氧糖剝奪(OGD)處理及神經(jīng)元條件培養(yǎng)基(NCM,OGD處理原代培養(yǎng)的皮質(zhì)神經(jīng)元的培養(yǎng)基)處理原代培養(yǎng)的小膠質(zhì)細胞均能明顯上調(diào)annex

3、in-1表達;并且發(fā)現(xiàn),這兩類處理均能夠上調(diào)小膠質(zhì)細胞的激活標記物Iba-1,并且和annexin-1的上調(diào)呈現(xiàn)出一致的趨勢;
　　2.Annexin-1的相應受體nFPRs主要在小膠質(zhì)細胞上表達,annexin-1模擬肽Ac2-26能夠活化nFPRs,引起細胞內(nèi)鈣濃度升高,同時能夠上調(diào)nFPRs的表達水平,神經(jīng)元條件培養(yǎng)基(NCM)同樣能夠上調(diào)nFPRs的表達水平;
　　3.Ac2-26主要通過激活小膠質(zhì)細胞上nFPRs來

4、保護缺血損傷的神經(jīng)元;
　　4.加強annexin-1和nFPRs之間的作用,能夠?qū)⑿∧z質(zhì)細胞向抗炎型的M2型轉(zhuǎn)換,由于小膠質(zhì)細胞具備吞噬能力,而細胞遷移是吞噬的起始條件,我們發(fā)現(xiàn),nFPRs介導的信號能夠促進小膠質(zhì)細胞遷移;
　　5.神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸和ATP能夠明顯上調(diào)小膠質(zhì)細胞的annexin-1表達水平,相反地,在NCM中加入NMDA受體拮抗劑MK-801和ATP降解酶Apyrase能夠阻斷NCM誘導的Annexin-1