p38 MAPK-MMP-9信號(hào)通路調(diào)控氣道炎癥和黏液高分泌的分子機(jī)制探討.pdf

1、目的:探討p38絲裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)信號(hào)通路及其特異性抑制劑SB203580在氣道炎癥、黏液高分泌中的作用，闡明p38MAPK、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在黏液高分泌與黏蛋白基因轉(zhuǎn)錄中的相互作用機(jī)制。 方法:成年雄性小鼠64只，實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為4組：生理鹽水對(duì)照組(NS組)、SB203580對(duì)照組(SB組)、丙烯醛模型組(Acro組)、丙烯醛+SB203580干預(yù)組(Acro+SB組)，每組16只。模型組霧化

2、吸入丙烯醛21天，干預(yù)組在吸入丙烯醛同時(shí)給予SB203580腹腔注射，采用生理鹽水及單純SB203580作為對(duì)照組。每組于第7天、第21天分別處死動(dòng)物8只，應(yīng)用HE、AB-PAS、免疫組織化學(xué)、RT-PCR和Western-Blot等方法分別觀察氣道炎癥、黏液高分泌改變及檢測(cè)磷酸化p38 MAPK、總p38MAPK、MMP-9和MIJC5AC的表達(dá)情況。 結(jié)果:小鼠吸入丙烯醛7天后出現(xiàn)氣道炎癥和黏液分泌增多，21天達(dá)到高峰，SB

3、203580干預(yù)組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少、杯狀細(xì)胞增生改善、黏液分泌明顯減輕；兩組AB-PAS陽(yáng)性著色面積分別為15.54±0.93％、9.82±0.56％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，生理鹽水吸入和單純SB203580對(duì)照組MUC5AC和MMP-9陽(yáng)性表達(dá)較少，吸入丙烯醛21天時(shí)表達(dá)量分別為0．1534±0．017、0．23±0．038，丙烯醛+SB203580干預(yù)組陽(yáng)染明顯較少，與模型組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P

4、<0．01)；同時(shí)，21天時(shí)丙烯醛模型組與同時(shí)相對(duì)照組比較，MUC5AC和MMP-9 mRNA(1．180±0．054、1．270±0．048)明顯升高，應(yīng)用SB203580治療后二者表達(dá)均顯著下調(diào)(P<0．01)，MMP-9與AB-PAS陽(yáng)染面積、MIJC5AC mRNA之間呈正相關(guān)；免疫印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)丙烯醛組總p38MAPK(1．0164±0．06)和pp38 MAPK(1．004±0．039)蛋白激活，經(jīng)SB203580干預(yù)后pp3

5、8 MAPK表達(dá)量下降(0．844±0．014)，與支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞總數(shù)、氣道上皮黏液物質(zhì)AB-PAS陽(yáng)性染色面積及MUC5AC、MMP-9 mRNA比較呈正相關(guān)； 結(jié)論:丙烯醛吸入可刺激小鼠早期產(chǎn)生氣道炎癥，隨著炎癥進(jìn)展，出現(xiàn)明顯氣道黏液高分泌，MMP-9可能參與對(duì)氣道黏液高分泌的調(diào)控；p38MAPK是丙烯醛致小鼠氣道黏液高分泌形成的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，SB203580可抑制p38 MAPK蛋白磷酸化，在轉(zhuǎn)錄水