四株海洋來(lái)源微生物胞外多糖的結(jié)構(gòu)和抗氧化活性研究.pdf

1、海洋是一種獨(dú)特復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)，蘊(yùn)含著豐富的生物資源。海洋極端和特殊的生存環(huán)境，使海洋微生物演化形成了較為特殊的代謝機(jī)制和途徑，其產(chǎn)生的胞外多糖在結(jié)構(gòu)和活性功能上新穎多樣。本文以4種不同海洋生境來(lái)源的微生物發(fā)酵液為研究對(duì)象，從中分離純化胞外多糖，并對(duì)其進(jìn)行理化性質(zhì)分析，結(jié)構(gòu)解析及體外抗氧化活性測(cè)定。研究結(jié)果如下:
　　1.從黃河三角洲表面鹽層泥土耐鹽真菌Cladosporium cladosporioidesOUCMDZ-2713的

2、發(fā)酵液中分離胞外多糖，采用Q Sepharose Fast Flow陰離子交換柱層析及Sephacryl S-100凝膠滲透柱層析對(duì)多糖進(jìn)行進(jìn)一步分離純化，得到多糖組分Ms4-1。高效凝膠滲透色譜(HPGPC)和PMP柱前衍生高效液相色譜(HPLC)分析表明，Ms4-1的分子量為19.8 kDa，單糖組成為Man、GlcN、GlcUA、GalNAc、Glc和Gal，其摩爾比為0.4∶0.4∶1.0∶1.5∶2.0∶0.2。通過(guò)部分酸水解

3、、甲基化分析、核磁共振波譜(1D，2D NMR)和質(zhì)譜(ESI-MS，ESI-CID-MS/MS)分析表明，Ms4-1主鏈主要由→3)-β-D-GlcpUA(1→、→4)-β-D-GlcpUA(1→和→3)-α-D-GalpNAc(1→組成的五糖核心結(jié)構(gòu)和Glc長(zhǎng)鏈組成，由Glc組成的長(zhǎng)鏈連接于五糖核心結(jié)構(gòu)中→3)-β-D-GlcpUA(1→的C-3上，Glc長(zhǎng)鏈由→4)-α-D-Glcp(1→組成。體外抗氧化活性測(cè)定表明，Ms4-1清

4、除DPPH自由基，超氧陰離子自由基和羥自由基活性的能力高，EC50值分別為1.06mg/mL、0.21mg/mL和0.58mg/mL。這是首次從耐鹽真菌Cladosporium cladosporioides中獲得結(jié)構(gòu)新穎且具有強(qiáng)抗氧化活性的雜多糖，為“海洋糖庫(kù)”提供了新穎特征的海洋胞外多糖。
　　2.從廣西潿洲島紅樹(shù)林根泥真菌Aspergillus versicolor PJX-9的發(fā)酵液中分離胞外多糖，采用Q Sepharos

5、e Fast Flow陰離子交換柱層析及Sephacyl S-100凝膠滲透柱層析對(duì)多糖進(jìn)行進(jìn)一步分離純化，得到兩個(gè)多糖組分Pw1-1和Ps1-1。HPGPC分析表明，Pw1-1和Ps1-1的分子量分別為12.3 kDa和13.6kDa; HPLC分析表明，Pw1-1和Ps1-1單糖組成相似，主要由Man組成，還有少量的Glc和Gal，摩爾比分別為9.3∶1.3∶1.0和6.4∶1.1∶2.1。甲基化分析表明，Pw1-1主要含有(1→2

6、)-Manp，還有少量(1→6)-Manp、(1→6)-Glcp、(1→2，6)-Manp及末端Manp和Galf。體外抗氧化活性測(cè)定表明，Pw1-1清除DPPH自由基、超氧陰離子自由基和羥基自由基的EC50分別為3.39mg/mL、1.50mg/mL和1.72mg/mL。
　　3.從山東東營(yíng)黃河三角洲自然保護(hù)區(qū)香蒲共生真菌A-154的發(fā)酵液中分離胞外多糖，通過(guò)Q Sepharose Fast Flow陰離子交換柱層析及Sepha

7、cyl S-100凝膠滲透柱層析純化得到兩個(gè)多糖組分Aw1-1和As1-1。HPGPC分析表明，Aw1-1和As1-1分子量分別為11.7kDa和6.6kDa; HPLC分析表明，Aw1-1含有Man和Gal，其摩爾比為14.1∶1.0。甲基化分析表明Aw1-1主要含有Manp(1→、(1→6)-Manp和(1→2，3)-Manp，還有少量Galf(1→及(1→2)-Manp。體外抗氧化活性測(cè)定表明，Aw1-1具有較強(qiáng)的清除自由基能力，

8、對(duì)DPPH自由基、超氧陰離子自由基和羥基自由基的清除EC50值分別為3.0mg/mL、1.21mg/mL和1.50mg/mL。
　　4.從南海文昌霞場(chǎng)紅樹(shù)林共附生真菌Aspergillus sp.FJ-6的發(fā)酵液中分離胞外多糖，通過(guò)Q Sepharose Fast Flow陰離子交換柱層析及Sephacyl S-100凝膠滲透柱層析純化得到四個(gè)多糖組分Fw1-1、Fs1-1、Fs2-1和Fs3-1，分子量分別為11.9kDa、17

9、.2kDa、16.4kDa和18.2kDa。Fw1-1的單糖組成為Man、Glc和Gal，摩爾比為5.2∶1.4∶1.0。甲基化分析表明，F(xiàn)w1-1含有大量(1→2)-Manp、(1→4)-Glcp和(1→2，3)-Manp，少量(1→6)-M anp、Manp(1→、Galf(1→和微量Glep(1→。大量(1→2，3)-Manp的存在表明Fw1-1是高分支結(jié)構(gòu)，分支點(diǎn)位于(1→2)-Manp的C-3位，F(xiàn)w1-1結(jié)構(gòu)新穎，在海洋真菌