產(chǎn)胞外多糖南極微生物的篩選及其胞外多糖的應(yīng)用研究.pdf

1、胞外多糖（exopolysaccharide，EPS）是微生物在生長(zhǎng)過(guò)程中分泌到周?chē)h(huán)境中的由多種單糖組成的大分子物質(zhì)，具有來(lái)源廣、易與菌體分離等優(yōu)點(diǎn)。極地微生物的胞外多糖具有許多不同的生物活性和新穎的化學(xué)結(jié)構(gòu)，在醫(yī)藥、食品加工、化工等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。本文采用苯酚硫酸法和醇沉法從10種不同的南極泥沙沉積物樣品中共篩選到132株產(chǎn)不同胞外多糖量的菌株，其中（A）產(chǎn)量低于20 mg/L的有7株，占產(chǎn)EPS菌株的5.3％；（B）產(chǎn)量在

2、20-60 mg/L的有25株，占產(chǎn)EPS菌株的18.94%；（C）產(chǎn)量在60-100 mg/L的有79株，占產(chǎn)EPS菌株的59.85%；（D）產(chǎn)量高于100 mg/L的有21株，占產(chǎn)EPS菌株的15.91%。其中來(lái)自不同篩選樣品、不同篩選批次產(chǎn)EPS量相對(duì)較高菌株W38-8、W29-21、W32-2、W13-13、W38-16、W32-3、W14-6、W18-3和W20-15，產(chǎn)量最高的三株菌分別為W38-8、W29-21、W32-2

3、，對(duì)應(yīng)的EPS產(chǎn)量分別為144.22 mg/L、125.61 mg/L、109.56 mg/L。經(jīng)過(guò)16S rDNA基因序列比對(duì)鑒定，這9株菌分別是Loktanella salsilacus，Rheinheimera soli，Shewanella frigidimarina，Planococcus halocryophilus，Marinobacter sp.， Shewanella sp.，Pseudomonas stutzeri，

4、Planococcus halocryophilus， Flavobacterium sp。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴針對(duì)培養(yǎng)條件較穩(wěn)定的W32-2菌株（Shewanella frigidimarina，EPS產(chǎn)量為109.56 mg/L），從多糖理化性質(zhì)及體外抗氧化活性、多糖對(duì)彩虹鯛非特異性免疫活性影響及EPS生產(chǎn)的發(fā)酵工藝等三個(gè)方面開(kāi)展深入研究。⑵采用Sevage法除蛋白后，考馬斯亮藍(lán)測(cè)定結(jié)果表明，W32-2粗多糖的蛋白含量

5、僅為0.5%；硫酸咔唑法測(cè)得W32-2胞外多糖的糖醛酸含量為8.46%；明膠比濁法測(cè)得EPS的硫酸基含量為83.35%，為酸性多糖。DPPH和超氧陰離子清除實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，W32-2產(chǎn)生的EPS對(duì)DPPH有一定的清除能力，當(dāng)質(zhì)量濃度為0.5 mg/mL時(shí)，抗氧化能力最強(qiáng)，對(duì)DPPH的清除能力達(dá)60.43%，對(duì)超氧陰離子的清除率達(dá)70.03%。⑶菌株W32-2所產(chǎn)EPS對(duì)彩虹鯛血液的非特異性免疫酶活初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該EPS在一定程度上可以

6、提高彩虹鯛非特異性免疫酶活。實(shí)驗(yàn)條件為：a）EPS濃度為3 mg/mL，b）EPS濃度為5 mg/mL， c）pH7.4的1×PBS，注射劑量均為0.1mL，分別在注射后第3 d、5 d、7 d、14d、21d和28d測(cè)其血清酶活。測(cè)試數(shù)據(jù)表明，注射EPS濃度為3 mg/L實(shí)驗(yàn)組的免疫增強(qiáng)效果較好。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，AKP活性最高是對(duì)照組的2.29倍，且在第三天達(dá)到最大；在實(shí)驗(yàn)第7 d時(shí)ACP酶活比對(duì)照組提高了51.18%，且SOD活力達(dá)