產胞外多糖南極微生物的篩選及其胞外多糖的應用研究.pdf

1、胞外多糖（exopolysaccharide，EPS）是微生物在生長過程中分泌到周圍環(huán)境中的由多種單糖組成的大分子物質，具有來源廣、易與菌體分離等優(yōu)點。極地微生物的胞外多糖具有許多不同的生物活性和新穎的化學結構，在醫(yī)藥、食品加工、化工等領域具有廣闊的應用前景。本文采用苯酚硫酸法和醇沉法從10種不同的南極泥沙沉積物樣品中共篩選到132株產不同胞外多糖量的菌株，其中（A）產量低于20 mg/L的有7株，占產EPS菌株的5.3％；（B）產量在

2、20-60 mg/L的有25株，占產EPS菌株的18.94%；（C）產量在60-100 mg/L的有79株，占產EPS菌株的59.85%；（D）產量高于100 mg/L的有21株，占產EPS菌株的15.91%。其中來自不同篩選樣品、不同篩選批次產EPS量相對較高菌株W38-8、W29-21、W32-2、W13-13、W38-16、W32-3、W14-6、W18-3和W20-15，產量最高的三株菌分別為W38-8、W29-21、W32-2

3、，對應的EPS產量分別為144.22 mg/L、125.61 mg/L、109.56 mg/L。經過16S rDNA基因序列比對鑒定，這9株菌分別是Loktanella salsilacus，Rheinheimera soli，Shewanella frigidimarina，Planococcus halocryophilus，Marinobacter sp.， Shewanella sp.，Pseudomonas stutzeri，

4、Planococcus halocryophilus， Flavobacterium sp。
　　本研究主要內容包括：⑴針對培養(yǎng)條件較穩(wěn)定的W32-2菌株（Shewanella frigidimarina，EPS產量為109.56 mg/L），從多糖理化性質及體外抗氧化活性、多糖對彩虹鯛非特異性免疫活性影響及EPS生產的發(fā)酵工藝等三個方面開展深入研究。⑵采用Sevage法除蛋白后，考馬斯亮藍測定結果表明，W32-2粗多糖的蛋白含量

5、僅為0.5%；硫酸咔唑法測得W32-2胞外多糖的糖醛酸含量為8.46%；明膠比濁法測得EPS的硫酸基含量為83.35%，為酸性多糖。DPPH和超氧陰離子清除實驗結果顯示，W32-2產生的EPS對DPPH有一定的清除能力，當質量濃度為0.5 mg/mL時，抗氧化能力最強，對DPPH的清除能力達60.43%，對超氧陰離子的清除率達70.03%。⑶菌株W32-2所產EPS對彩虹鯛血液的非特異性免疫酶活初步實驗結果表明，該EPS在一定程度上可以

6、提高彩虹鯛非特異性免疫酶活。實驗條件為：a）EPS濃度為3 mg/mL，b）EPS濃度為5 mg/mL， c）pH7.4的1×PBS，注射劑量均為0.1mL，分別在注射后第3 d、5 d、7 d、14d、21d和28d測其血清酶活。測試數據表明，注射EPS濃度為3 mg/L實驗組的免疫增強效果較好。在整個實驗期間，AKP活性最高是對照組的2.29倍，且在第三天達到最大；在實驗第7 d時ACP酶活比對照組提高了51.18%，且SOD活力達