菜心miR156轉(zhuǎn)基因芽系的獲得及不同氮素營養(yǎng)條件下其靶基因的表達分析.pdf

1、菜心在我國栽培十分廣泛，是我國栽培面積和消費量最大的蔬菜之一。它因營養(yǎng)豐富、生育期短、適應性強而深受人們青睞。但菜心植株矮小，營養(yǎng)生長期短，且每株可采收葉片少，葉片短，葉柄細小，采收期短且生物產(chǎn)量，因此，利用現(xiàn)代生物技術(shù)對菜心進行遺傳改良具有重要意義。miR156在多種植物中存在，且高度保守，通過調(diào)控起靶基因SPLs的表達，調(diào)控植物的生長發(fā)育，是調(diào)控植物營養(yǎng)生長的重要內(nèi)源因子。
　　本文通過進化樹分析選取白菜的miR156前體序列

2、，從油青49菜心中克隆了含miR156a莖環(huán)結(jié)構(gòu)的片段構(gòu)建超表達載體，并利用模擬序列構(gòu)建了mimicry156載體分別轉(zhuǎn)入油青49菜心中獲得轉(zhuǎn)基因植株。另外，本文通過水培野生型油青49菜心研究N素含量對小白菜營養(yǎng)生長的影響，探究miR156及其靶基因在不同氮素水平下的表達量，分析其分子機理。
　　研究結(jié)果如下:
　　1、進化樹分析顯示白菜的miR156家族與擬南芥、水稻都具有較高的同源性，白菜miR156a前體序列與擬南芥中

3、起主要調(diào)控作用的ath-miR156a和ath-miR156c親緣性最高;
　　2、克隆了菜心miR156a并構(gòu)建miR156超表達載體和靶基因模擬mimicry156表達載體并成功轉(zhuǎn)化菜心油青49，獲得轉(zhuǎn)基因株系，建立了一套適用于菜心轉(zhuǎn)基因的遺傳體系。
　　3、通過熒光定量分析菜心在不同N濃度下miR156靶基因bra-SPLs基因的表達量發(fā)現(xiàn)bra-SPL3、bra-SPL4、bra-SPL9、bra-SPL10、bra