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文檔簡介
1、MicroRNAs包括了miRNAs和siRNAs,是一類由21-24個(gè)堿基構(gòu)成的具有保守結(jié)構(gòu)域的非編碼RNA。MicroRNAs在動(dòng)植物中廣泛存在且對其生長和發(fā)育具有重要的調(diào)控作用。MicroRNAs主要是通過靶定下游的相關(guān)基因,影響其轉(zhuǎn)錄后水平的表達(dá)來調(diào)控植物體的一系列生長發(fā)育過程。miR156是一種古老的MicroRNAs,在植物體中miR156具有高度保守的結(jié)構(gòu)域。大量研究表明,miR156通過靶定SQUAMOSA-promot
2、er binding-like(SPL)轉(zhuǎn)錄因子在植物的階段發(fā)育和成花轉(zhuǎn)變時(shí)期起到重要的調(diào)控作用。本實(shí)驗(yàn)室前期通過轉(zhuǎn)錄組測序得到了枳屬中miR156的三個(gè)前體序列,分別是PtmiR156a、PtmiR156b和PtmiR156c。本研究分離了柑橘不同種屬的3個(gè)miR156家族基因,并進(jìn)行了序列分析。同時(shí),采用STTM的方法構(gòu)建了三個(gè)基因的干涉載體,轉(zhuǎn)化普通枳和伏令夏橙愈傷,初步探究其在柑橘階段發(fā)育和成花轉(zhuǎn)變中所起的作用。得到結(jié)果如下:<
3、br> 1.在甜橙、普通枳和早實(shí)枳中分別克隆miR156家族基因,通過測序比對分析,其核心序列沒有變化,而側(cè)翼序列僅有個(gè)別堿基變化;通過對擬南芥、水稻和甜橙中miR156家族基因的克隆分析可知,在不同物種間,miR156的核心序列同源性很高而側(cè)翼序列差別較大。這一結(jié)果表明:miR156家族基因在物種間的廣泛存在且高度保守。
2.分別提取普通枳和早實(shí)枳不同年齡時(shí)期葉片以及成熟花器官的RNA,通過Real-time PCR檢測了
4、miR156家族基因在營養(yǎng)階段和成花轉(zhuǎn)變時(shí)期的表達(dá)量變化。結(jié)果表明:miR156家族基因在幼嫩葉片中表達(dá)很高,隨著葉齡的增加而逐漸減少;而在成熟花器官的各部位中表達(dá)差異較大,表明miR156參與了年齡途徑和成花轉(zhuǎn)變,并在其中起到重要的調(diào)控作用。
3.采用了Short Tandem Target Mimic(STTM)的方法成功構(gòu)建了35S∷PtmiR156a、156b、156c的干涉載體,轉(zhuǎn)化普通枳和伏令夏橙愈傷,初步探究mi
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