傳染性法氏囊病超強(qiáng)毒觸發(fā)炎癥的檢測及HMGB1促炎作用的研究.pdf

1、雞傳染性法氏囊病(infectious bursal disease，IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus，IBDV)引起的主要危害雛雞的一種急性、致死性、高度接觸性傳染病。IBDV先后演化出了經(jīng)典毒株(classic IBDV,cIBDV)、變異毒株(ariant IBDV,vIBDV)以及超強(qiáng)毒株(very virulent IBDV,vvIBDV)，vvIBDV的高致死率給

2、世界養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。vvIBDV感染能夠引起典型的炎癥反應(yīng)，造成法氏囊等免疫器官出血、損傷甚至萎縮，以及導(dǎo)致肌肉、腺胃等組織的不同程度炎癥，但當(dāng)前對vvIBDV觸發(fā)炎癥甚至導(dǎo)致死亡的過程和分子基礎(chǔ)尚不明確。
　　本研究首先從臨床、病理和分子水平檢測了vvIBDV觸發(fā)的炎癥反應(yīng)。vvIBDV Gx毒株感染SPF雞后，臨床癥狀明顯，發(fā)病迅速，感染后3-5天呈現(xiàn)死亡高峰，此時(shí)期的剖檢病變最為典型，表現(xiàn)為多器官炎癥，以法氏囊炎

3、癥最為嚴(yán)重，出血、黃染、萎縮，有炎性滲出。顯微組織病理學(xué)檢查顯示，感染雞的法氏囊濾泡結(jié)構(gòu)完整性受損，有大量炎性細(xì)胞浸潤，B細(xì)胞崩解為細(xì)胞碎片并被目噬細(xì)胞吞噬。在分子水平上，熒光定量RT-PCR檢測出感染后脾臟中炎癥因子IL-1β和IL-18表達(dá)上調(diào)，ELISA檢測出血清中IL-1β和IL-18含量上升。以上結(jié)果表明，炎癥是vvIBDV致病的重要過程。
　　損傷相關(guān)分子模式（damage associated moleculer p

4、attern，DAMP）與炎癥關(guān)系密切。本研究進(jìn)一步建立了熒光定量RT-PCR方法，并檢測了vvIBDV感染在觸發(fā)炎癥的同時(shí)對六種DAMP分子的影響。研究發(fā)現(xiàn)，多數(shù)DAMP分子在脾臟中呈上調(diào)表達(dá)，在法氏囊中呈下調(diào)表達(dá)，這與IL-1β和IL-18的表達(dá)變化情況呈正相關(guān)。這提示，DAMP可能與IBDV致炎密切相關(guān)。進(jìn)而，作為DAMP的重要成員，重點(diǎn)檢測了高遷移率蛋白1（high mobility group box1，HMGB1）在vvIB

5、DV致炎過程中的變化:HMGB1在血清中以及法氏囊炎性滲出液中均呈現(xiàn)上調(diào)。同步做的另一個(gè)不同毒力IBDV的感染試驗(yàn)也證實(shí)了上述數(shù)據(jù)。據(jù)此我們推測，HMGB1在vvIBDV致炎過程中可能發(fā)揮重要作用。
　　為證實(shí)這一假說，本研究建立了vvIBDV體外感染B淋巴細(xì)胞（DT40細(xì)胞）的模型。在此基礎(chǔ)上，研究發(fā)現(xiàn)，vvIBDV Gx株感染DT40，導(dǎo)致HMGB1在細(xì)胞內(nèi)含量減少，大量釋放到細(xì)胞外。細(xì)胞內(nèi)HMGB1發(fā)揮了抗IBDV復(fù)制的作用

6、，HMGB1的上調(diào)表達(dá)、敲低、功能被抑制對IBDV復(fù)制的影響均證明了這一點(diǎn)。釋放到細(xì)胞外的HMGB1作為炎癥介質(zhì)發(fā)揮了促炎作用。HMGB1蛋白體外刺激雞巨噬細(xì)胞系HD11后，細(xì)胞上清中IL-1β和IL-18增多;同時(shí)，HMGB1顯著提高了HD11細(xì)胞的NLRP3炎癥小體中casepase-1激酶活性。這提示了vvIBDV觸發(fā)炎癥的可能機(jī)制，vvIBDV感染法氏囊B淋巴細(xì)胞觸發(fā)了HMGB1的釋放，提高了HMGB1在局部組織和血液中的含量，