異三尖杉酯堿(isoharringtonine)對三階性乳腺癌的抑制作用研究.pdf

1、在乳腺癌所有亞型中，三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)是惡性程度較高的一種，在臨床上表現為高轉移，高復發(fā)和低治愈率的特點。由于缺乏ER受體、PR受體和HER2受體不表達或低表達，因此靶向特異受體的激素治療無法應用于TNBC的治療。新輔助治療方案是用于TNBC治療的主要手段，并在臨床上取得了一定的治療效果，但是所用的化療藥物會誘使腫瘤細胞產生藥物耐藥性和無法克服乳腺癌的復發(fā)問題。而目前的腫

2、瘤干細胞理論認為腫瘤干細胞是腫瘤細胞中能夠自我更新，分化和增殖，起始腫瘤的發(fā)生，具有類似正常干細胞特性的一小群細胞，因而又被稱為腫瘤起始細胞(tumor initiation cells，TICs)，對腫瘤的發(fā)生發(fā)展，腫瘤的耐藥性，腫瘤的復發(fā)起至關重要的作用。因此，對于腫瘤干細胞和靶向乳腺癌干細胞藥物的研究成為日益受關注的焦點。
　　多種信號通路參與腫瘤干細胞的調控，相關的信號通路主要有以下幾種:Wnt信號通路、Notch信號通路

3、、Hedgehog信號通路、TGF-β/BMP信號通路以及Jak/Stat信號通路等。例如Wnt信號通路促進干細胞相關的轉錄因子NANOG,SOX2和OCT4表達，而STAT3能夠與NANOG的啟動子區(qū)結合啟動NANOG的轉錄，從而影響的細胞的干性。在乳腺癌中，對與乳腺癌干細胞(breast cancer stem cells，BCSCs)群CD44+CD24-細胞的穩(wěn)態(tài)維持，JAK2/STAT3信號通路是必須的。
　　異三尖杉酯

4、堿(isoharringtonine，IHT)，是一種從三尖杉(Cephalotaxus harringtonia)中提取的生物酯堿類化合物，與高三尖杉酯堿(homoharringtonine，HHT)是類似物。目前關于IHT的研究報道甚少，而對于HHT的研究則很多。在臨床上，HHT主要用于骨質增生綜合征，慢性白血病和急性白血病的治療。HHT可以促進細胞的凋亡和抑制JAK1/STAT3信號通路。雖然關于HHT對乳腺干細胞的作用效果并沒有

5、研究，但是其作用機制暗示了HHT可能會抑制BCSCs，IHT對腫瘤干細胞也有抑制效果，機制也可能相似。在本研究中，基于IHT與HHT的結構的不同，我們探究了IHT對乳腺癌細胞干細胞的抑制作用和機制。
　　目前TNBC的治療藥物會誘使乳腺癌于細胞的增加而改變乳腺的異質性提高對治療藥物的耐藥性，如紫杉醇，且并不能抑制乳腺癌的復發(fā)。而目前認為乳腺癌干細胞參與起始乳腺的發(fā)生發(fā)展，乳腺細胞的轉移，免疫系統的逃逸和對轉移灶微環(huán)境的改造，由于上

6、述因素進而導致乳腺癌化療藥物的耐藥性，因此靶向乳腺癌干細胞的治療方案成為克服以上問題的一個研究關注點。本研究通過MTS實驗檢測IHT對TNBC細胞增殖的作用，wound healing assay實驗分析IHT對細胞遷移的影響，流式細胞術探究IHT對TNBC癌干細胞的抑制效果以及對STAT3蛋白水平和NANOG的轉錄水平檢測揭示IHT可能的機制。結果顯示，在0nM到300nM和0nM到600nM濃度范圍內的IHT處理細胞24h后，IHT

7、可以抑制TNBC細胞系HCC1806和HCC1937細胞的增殖，隨著濃度升高，抑制效果越顯著，而在此濃度范圍內并不引起HCC1806或HCC937的凋亡或死亡。同樣的濃度和處理條件下，IHT不僅對HCC1806或HCC1937細胞的遷移有顯著的抑制效果，而且也能減少細胞群中BCSCs(CD44+CD24-)細胞的比例，soft-agar clone和tumorsphere形成分析佐證了流式細胞術的結果。Western blot的檢測結果

8、發(fā)現，在以上濃度的IHT處理HCC1806或HCC1937細胞24h后，p-STAT3的水平顯著下降，同時我們檢測了STAT3的下游基因NANOG的轉錄水平，發(fā)現NANOG的轉錄受抑制效果顯著，而NANOG是腫瘤干細胞的穩(wěn)態(tài)維持的關鍵轉錄因子，雖然IHT的機制與HHT類似，能夠抑制STAT3的蛋白水平，但不同的是，IHT并不導致細胞的凋亡。雖然在蛋白水平并未檢測到EMT標記分子和細胞周期蛋白的變化，但根據結果分析，IHT很可能通過對ST