加味四逆散對(duì)慢性身心應(yīng)激模型大鼠胃腸結(jié)構(gòu)及功能的影響.pdf

1、目的：建立慢性身心應(yīng)激大鼠模型，研究加味四逆散對(duì)慢性身心應(yīng)激模型大鼠行為學(xué)、胃排空、小腸推進(jìn)、胃電圖、胃腸神經(jīng)遞質(zhì)的影響，從不同方面探討加味四逆散干預(yù)應(yīng)激性胃腸功能障礙的機(jī)制。另建立慢性身心應(yīng)激大鼠模型，研究加味四逆散對(duì)慢性身心應(yīng)激模型大鼠胃粘膜形態(tài)、胃粘膜EGF、EGFR蛋白、胃粘膜三葉因子1(TFF1)、內(nèi)皮素1(ET-1)mRNA表達(dá)的影響，從形態(tài)結(jié)構(gòu)的角度研究加味四逆散對(duì)慢性身心應(yīng)激模型大鼠的影響，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探討。

2、>　　 方法：
　　 第一部分:取Wistar雄性大鼠60只，隨機(jī)分為6組，即正常組、模型組、西沙比利組、加味四逆散方高，中，低劑量組，每組10只，除空白組外，其他五組均采用身心應(yīng)激方式造模，連續(xù)造模4周。從第3周起加味四逆散方高，中，低劑量組灌胃治療，西沙比利組以西沙比利混懸液灌胃治療;空白、模型組則給予等體積生理鹽水灌胃治療。(1)造模期間，每日觀察并記錄各組大鼠精神狀態(tài)、興奮程度、情緒反應(yīng)、行為狀態(tài)、活躍狀況、睡眠行為，

3、皮膚毛發(fā)色澤和狀態(tài)等情況，每天觀察并記錄大鼠的飲水量、進(jìn)食量，分別于實(shí)驗(yàn)前1天和試驗(yàn)后的第7、14、21、28 d用電子秤稱量每只大鼠體重，觀測(cè)大鼠體質(zhì)量改變情況;造模結(jié)束后行曠場(chǎng)試驗(yàn)（Open-field法）測(cè)定實(shí)驗(yàn)大鼠跨格運(yùn)動(dòng)次數(shù)和直立運(yùn)動(dòng)次數(shù)并在實(shí)驗(yàn)室游泳池內(nèi)測(cè)定大鼠游泳力竭時(shí)間。(2)經(jīng)加味四逆散等干預(yù)后于4周末空腹檢測(cè)模型大鼠胃腸動(dòng)力，用生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)觀察試驗(yàn)大鼠胃電變化，了解正常組，模型組，加味四逆散高，中，低劑量組，西沙

4、比利組大鼠的胃電活動(dòng)在幅度、頻率上的差異，檢測(cè)完畢后對(duì)正常組，模型組，加味四逆散高，中，低劑量組，西沙比利組胃腸動(dòng)力及胃電圖相應(yīng)數(shù)據(jù)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。(3)應(yīng)激刺激造模結(jié)束后免疫組化法測(cè)定實(shí)驗(yàn)大鼠胃粘膜組織COX-2、結(jié)腸粘膜組織c-kit的平均光密度值變化。
　　 第二部分:Wistar雄性大鼠60只隨機(jī)分為6組，即正常組、模型組、奧美拉唑組、加味四逆散方高，中，低劑量組，每組10只，除空白組外，其他五組均給予身心應(yīng)激方式造

5、模，連續(xù)造模4周。從第3周起加味四逆散方高，中，低劑量組用加味四逆散灌胃治療，奧美拉唑組以奧美拉唑混懸液灌胃治療;空白、模型組則給予等體積生理鹽水灌胃治療。(1)應(yīng)激刺激造模結(jié)束后行胃粘膜形態(tài)及結(jié)構(gòu)，胃酸及胃粘膜血流量的檢測(cè)。(2)應(yīng)激刺激造模結(jié)束后行胃粘膜EGF、EGFR蛋白表達(dá)檢測(cè)。(3)應(yīng)激刺激造模結(jié)束后逆轉(zhuǎn)錄PCR法測(cè)定模型大鼠胃粘膜三葉因子1(TFF1) mRNA、內(nèi)皮素1(ET-1)mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：

6、r>　　 第一部分結(jié)果:
　　 (1)受試大鼠在實(shí)驗(yàn)前均表現(xiàn)出良好的精神狀態(tài)，隨應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，第3周以后模型組大鼠的飲水量及攝食量呈現(xiàn)顯著的下降趨勢(shì)，而加味四逆散方各劑量組及西沙比利組用藥后飲水量及攝食量下降趨勢(shì)不同程度減緩，至第4周，其飲水量、攝食量不同程度增加，與模型組比較，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01);與西沙比利組比較，加味四逆散高劑量組大鼠飲水量及攝食量明顯增加，差異有顯著性意義(P＜0.05);造

7、模后的第4周末，與模型組比較，加味四逆散方各劑量組及西沙比利組體重增長(zhǎng)不同程度增加，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01);與西沙比利組比較，第4周末加味四逆散高劑量組體重增長(zhǎng)量增加顯著，差異有顯著性意義(P＜0.05);第4周末，與模型組比較，加味四逆散方各劑量組及西沙比利組跨格運(yùn)動(dòng)、垂直運(yùn)動(dòng)的得分均明顯增加，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01);與西沙比利組比較，加味四逆散高劑量組跨格運(yùn)動(dòng)及垂直運(yùn)動(dòng)得分均明顯增加，

8、差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01);造模后第4周末，與模型組比較，加味四逆散方高、中、低劑量組及西沙比利組力竭游泳時(shí)間不同程度延長(zhǎng)，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01)，與西沙比利組比較，加味四逆散高劑量組力竭游泳時(shí)間明顯增加，差異有顯著性意義(P＜0.05)。
　　 (2)與模型組比較，加味四逆散各劑量組，西沙比利組胃排空率及小腸推進(jìn)比均明顯升高，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01);與西沙比利

9、組比較，加味四逆散高劑量組胃排空率升高不明顯（P＞0.05），而小腸推進(jìn)比升高明顯(P＜0.05);與模型組比較，加味四逆散各劑量組，西沙比利組慢波節(jié)律、主頻率、主功率、快波頻率、胃電慢波振幅明顯增強(qiáng)，差異有顯著性意義（P＜0.05或P＜0.01），其中加味四逆散高劑量組大鼠胃電波接近正常水平;與西沙比利組比較，加味四逆散高劑量組大鼠慢波節(jié)律及快波頻率均有明顯增強(qiáng)(P＜0.05或P＜0.01);
　　 (3)與模型組比較，加味四

10、逆散各劑量組、西沙比利組大鼠胃粘膜組織COX-2平均光密度值不同程度降低，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01);與西沙比利組比較，加味四逆散中，高劑量組大鼠胃粘膜組織COX-2平均光密度值降低，差異有顯著性意義（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，加味四逆散各劑量組、西沙比利組大鼠結(jié)腸粘膜組織c-kit平均光密度值不同程度升高，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01);與西沙比利組比較，加味四逆散中，高劑量組大鼠

11、結(jié)腸粘膜組織c-kit平均光密度值升高，差異有顯著性意義（P＜0.05或P＜0.01）。
　　 第二部分結(jié)果:
　　 (1)各組大鼠胃粘膜血流量變化的比較:與模型組比較，加味四逆散各劑量組、奧美拉唑組大鼠胃粘膜血流量不同程度升高，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01);與奧美拉唑組比較，加味四逆散中，高劑量組大鼠胃粘膜血流量升高，差異有顯著性意義（P＜0.05或P＜0.01）。各組大鼠胃液總酸度（pH值）變化的比

12、較:與模型組比較，加味四逆散各劑量組、奧美拉唑組大鼠胃液PH值不同程度升高，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01);與奧美拉唑組比較，加味四逆散中，高劑量組大鼠胃液PH值升高不明顯，差異無顯著性意義（P＞0.05）。各組大鼠肉眼下胃粘膜形態(tài)變化的比較:加味四逆散高劑量組大鼠胃粘膜損傷減輕最明顯，已接近正常水平，奧美拉唑組、加味四逆散中劑量組及加味四逆散低劑量組大鼠胃粘膜不同程度好轉(zhuǎn)。各組大鼠胃粘膜損傷潰瘍指數(shù)(UI)變化的比較:

13、與模型組比較，加味四逆散各劑量組、奧美拉唑組大鼠胃粘膜損傷潰瘍指數(shù)(UI)不同程度降低，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01);與奧美拉唑組比較，加味四逆散高劑量組大鼠胃粘膜損傷潰瘍指數(shù)(UI)明顯降低，差異有顯著性意義(P＜0.05)。各組大鼠胃黏膜病理組織學(xué)觀察及損傷程度評(píng)級(jí)變化的比較:模型組大鼠胃粘膜出血壞死潰瘍明顯。加味四逆散高劑量組鏡下可見胃粘膜病損程度較模型組顯著減輕，加味四逆散中、低劑量組可見胃粘膜不同程度好轉(zhuǎn)。各

14、組大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化比較:模型組大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞壞死明顯。加味四逆散高劑量組大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞間連接緊密，胞膜結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞核形態(tài)正常。奧美拉唑組大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞胞膜結(jié)構(gòu)基本完整，胞漿中細(xì)胞器分布欠均勻。加味四逆散中、低劑量組大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞不同程度恢復(fù)正常;
　　 (2)各實(shí)驗(yàn)組大鼠胃粘膜組織的EGF及EGFR蛋白平均光密度值比較:與模型組比較，加味四逆散各劑量組、奧美拉唑組大鼠胃粘膜組織EGF蛋白平均光密度

15、值不同程度降低，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01);與奧美拉唑組比較，加味四逆散中，高劑量組大鼠胃粘膜組織EGF蛋白平均光密度值降低，差異有顯著性意義（P＜0.05或P＜0.01）;與模型組比較，加味四逆散各劑量組、奧美拉唑組大鼠胃粘膜組織EGFR蛋白平均光密度值不同程度降低，差異有顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01);與奧美拉唑組比較，加味四逆散中，高劑量組大鼠胃粘膜組織EGFR蛋白平均光密度值降低，差異有顯著性意義（

16、P＜0.05或P＜0.01）。
　　 (3)各組大鼠胃粘膜三葉因子1(TFF1)、內(nèi)皮素1(ET-1)mRNA的比較:與模型組比較，加味四逆散各劑量組、奧美拉唑組大鼠胃粘膜三葉因子1(TFF1)mRNA相對(duì)表達(dá)量不同程度升高，差異有顯著性（P＜0.05或P＜0.01）;與奧美拉唑組比較，加味四逆散中，高劑量組大鼠胃粘膜三葉因子1(TFF1) mRNA相對(duì)表達(dá)量不同程度升高，差異有顯著性（P＜0.05或P＜0.01）;與模型組比較

17、，加味四逆散各劑量組、奧美拉唑組大鼠胃粘膜內(nèi)皮素1(ET-1) mRNA相對(duì)表達(dá)量不同程度降低，差異有顯著性(P＜0.05或P＜0.01);與奧美拉唑組比較，加味四逆散中，高劑量組大鼠胃粘膜內(nèi)皮素1(ET-1)mRNA相對(duì)表達(dá)量降低，差異有顯著性(P＜0.05或P＜0.01);
　　 結(jié)論：
　　 從第一部分可知:
　　 (1)加味四逆散可顯著改善慢性身心應(yīng)激模型大鼠行為學(xué)的異常，解除因應(yīng)激導(dǎo)致的模型大鼠的抑郁狀

18、況。
　　 (2)加味四逆散能夠明顯改善慢性身心應(yīng)激大鼠的胃電波異常，可促進(jìn)胃排空和小腸推進(jìn)，其作用可能是通過促進(jìn)胃電活動(dòng)，增快胃平滑肌收縮等途徑而實(shí)現(xiàn)的，同時(shí)加味四逆散促進(jìn)大鼠胃腸動(dòng)力的效應(yīng)呈量效關(guān)系。
　　 (3)加味四逆散可顯著改善慢性身心應(yīng)激模型大鼠胃腸神經(jīng)遞質(zhì)的異常，緩解因胃腸神經(jīng)遞質(zhì)紊亂導(dǎo)致的模型大鼠胃腸功能失調(diào)。
　　 從第二部分可知:
　　 (1)加味四逆散可顯著改善慢性身心應(yīng)激模型大鼠胃