熊果酸Pluronic F127納米膠束的制備及其對大腸癌細胞生長的影響.pdf

1、目的：
　　研究熊果酸(Ursolic acid，UA) Pluronic F127納米膠束(FUP)對大腸癌細胞生長的影響，并從分子水平探討其作用機制，為熊果酸的進一步研發(fā)提供理論依據(jù)及實驗基礎(chǔ)，并為改進熊果酸劑型提供新的思路。
　　方法：
　　1.熊果酸F127納米膠束(FUP)的制備及表征:Pluronic F127作為納米載體，PEI改變電性，運用自組裝法制備載UA的納米膠束FUP。采用透射電子顯微鏡(TEM)

2、觀察膠束形貌;采用Nano ZS納米粒度及Zeta電位儀測定分析其粒徑大小、多分散性指數(shù)(PDI)以及Zeta電位等表征;采用傅里葉紅外光譜測定FUP的紅外吸收情況;采用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）檢測計算其載藥量、包封率及體外藥物釋放率。
　　2.FUP對大腸癌細胞生長的抑制作用:選用大腸癌細胞HCT116及HCT-8作為研究對象;采用MTT法評價FUP

3、對大腸癌細胞活力的影響;通過倒置顯微鏡觀察FUP對大腸癌細胞形態(tài)的影響;通過集落形成實驗觀察FUP對大腸癌細胞集落形成能力的影響;通過DAPI染色以及Annexin V/PI染色觀察FUP對大腸癌細胞凋亡的影響;進一步通過檢測細胞DNA含量，研究FUP對大腸癌細胞周期的影響;通過Western Blot檢測FUP對大腸癌細胞中凋亡相關(guān)基因Fas、FasL及活化的caspase-8、caspase-3蛋白水平的影響。
　　結(jié)果：

4、r>　　1.FUP的制備及表征:運用自組裝法成功制備了納米膠束FUP，采用TEM結(jié)果顯示膠束成圓球狀，大小較均勻;Nano ZS納米粒度及Zeta電位儀測得其平均粒徑為100.50±0.38 nm，PDI為0.134，Zeta電位為20.1±0.41 mV;紅外光譜圖顯示FUP中UA的存在;HPLC測定計算FUP的載藥量為15.2±0.12％，包封率為36.64±0.26％; FUP的體外藥物釋放在初期(24h)較快，然后進入緩釋階段，

5、在第6天時，F(xiàn)UP的UA累計釋放量為71.7％。
　　2.FUP對大腸癌細胞生長的影響及其機制:經(jīng)MTT法驗證FUP對大腸癌細胞HCT116及HCT-8的活力具有明顯的抑制作用(P＜0.05)，同等劑量(≤20μM)的UA及F127則無明顯抑制作用;細胞形態(tài)學(xué)觀察顯示，與對照組比較，F(xiàn)127、UA均未明顯降低細胞密度，而FUP可明顯減少細胞數(shù)量;集落形成實驗顯示F127對細胞集落形成能力無抑制作用，UA及FUP對細胞集落形成能力的

6、均有抑制作用(P＜0.05)，但FUP對HCT116及HCT-8細胞集落形成能力的抑制作用更強;DAPI染色以及AnnexinV/PI染色提示F127、UA對細胞凋亡無明顯影響，而FUP可增加細胞凋亡，且具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，表明FUP對HCT116及HCT-8細胞凋亡的具有促進作用;細胞周期檢測結(jié)果顯示，F(xiàn)127、UA對細胞周期無影響，而FUP顯著增加G1期細胞的比例，降低S期細胞的比例，使細胞周期阻滯于G1期，且具有統(tǒng)計學(xué)

7、差異(P＜0.05);WesternBlot檢測結(jié)果表明FUP能顯著上調(diào)Fas、FasL及活化的caspase-8、caspase-3蛋白水平表達。
　　結(jié)論：
　　運用自組裝法成功制備了納米膠束FUP，其粒徑大小適中，分散性、穩(wěn)定性好;FUP對大腸癌細胞活力、集落形成能力、增殖能力的抑制作用和對凋亡的促進作用優(yōu)于相同劑量的UA，說明其具有提高UA生物利用度的作用;FUP促進HCT116、HCT-8細胞凋亡的作用可能與調(diào)控F