紫草素對(duì)Cx32組成的宮頸癌Hela細(xì)胞縫隙連接功能的影響.pdf

1、目的：在轉(zhuǎn)染并穩(wěn)定表達(dá)縫隙連接蛋白Cx32的宮頸癌Hela細(xì)胞上，觀察紫草素對(duì)縫隙連接GJ功能和縫隙連接蛋白Cx32的表達(dá)水平的影響，以及對(duì)順鉑細(xì)胞毒性作用的影響。
　　方法：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和蛋白免疫印跡法對(duì)轉(zhuǎn)染并穩(wěn)定表達(dá)Cx32的Hela細(xì)胞系進(jìn)行驗(yàn)證；CCK-8法測(cè)定用于研究GJ功能作用的紫草素濃度；用細(xì)胞接種熒光示蹤法（Parachute assay）觀察不同濃度紫草素對(duì)GJ功能的影響；用蛋白免疫印跡（Wester

2、n-blot）法研究紫草素對(duì)縫隙連接蛋白Cx32的蛋白表達(dá)的影響。用標(biāo)準(zhǔn)集落形成法（standard colony-forming assay）測(cè)定紫草素對(duì)順鉑細(xì)胞毒性的影響。
　　結(jié)果：用多西環(huán)素培養(yǎng)的細(xì)胞有Cx32擴(kuò)增，也有Cx32的表達(dá)，沒(méi)有用多西環(huán)素的細(xì)胞沒(méi)有Cx32擴(kuò)增，也沒(méi)有Cx32的表達(dá)；對(duì)于不用多西環(huán)素誘導(dǎo)的細(xì)胞，即無(wú)Cx表達(dá)時(shí)，紫草素4μM濃度以下對(duì)Hela細(xì)胞無(wú)毒性作用；用多西環(huán)素誘導(dǎo)的細(xì)胞，紫草素3μM濃度以

3、下對(duì)Hela細(xì)胞無(wú)毒性作用；紫草素處理組細(xì)胞間熒光傳遞量在1-3μM隨濃度的增加而增加；紫草素在（1-3μM）能濃度依賴性增強(qiáng)GJ功能及Cx32的表達(dá)。在有GJ形成時(shí)，3μM紫草素可以增強(qiáng)順鉑降低細(xì)胞集落形成率的作用。
　　結(jié)論：驗(yàn)證Cx32質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成功，構(gòu)建了可調(diào)控表達(dá)Cx32的細(xì)胞系。紫草素能增強(qiáng)Cx32組成的GJ功能。紫草素對(duì)GJ功能的增強(qiáng)作用與Cx32的表達(dá)有關(guān)。在有GJ形成的Hela細(xì)胞（生長(zhǎng)融合），3μM紫草素可以增強(qiáng)