Mda-7基因?qū)m頸癌Hela細(xì)胞生長(zhǎng)及凋亡的影響.pdf

1、目的:研究mda-7基因?qū)m頸Hela細(xì)胞生長(zhǎng)及凋亡作用。 方法:采用DNA重組技術(shù)，構(gòu)建mda-7真核表達(dá)載體pCDNA3.1(一)-mda-7，用電擊法將重組質(zhì)粒及空載體轉(zhuǎn)染宮頸癌Hela細(xì)胞，用G418篩選mda-7基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染克隆。經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)鑒定mda-7mRNA表達(dá)后，用MTT法檢測(cè)Hela細(xì)胞的體外增殖能力、hoechst33258熒光染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)宮頸癌Hela細(xì)胞的凋亡。 結(jié)果

2、: 1.經(jīng)G418篩選，一周后陰性對(duì)照組全部死亡，空載體組和mda-7組形成少量細(xì)胞克隆，兩周時(shí)空載體組和mda-7組形成大量細(xì)胞克隆。 2.半定量RT-PCR法三組Hela細(xì)胞中都可見(jiàn)mda-7mRNA的表達(dá)，陰性對(duì)照組、空載體組及mda-7組Hela細(xì)胞中mda-7 mRNA相對(duì)表達(dá)水平分別是(0.56±0.003、0.55±0.007、0.92±0.005)。三組Hela細(xì)胞中mda-7 mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較，

3、差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5280.849，P<0.001)?？蛰d體組和陰性對(duì)照組細(xì)胞中mda-7mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較，無(wú)顯著性差異(P>0.05)，兩者與mda-7組細(xì)胞之間mda-7mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較，有顯著性差異(P<0.05)。 3.MTT比色法Mda-7組和空載體組Hela細(xì)胞的吸光度值相比，具有顯著性差異(P=0.000)，Mda-7組和陰性對(duì)照組的Hela細(xì)胞相比，具有顯著性差異(P=0.000)，陰性對(duì)照

4、組和空載體組的Hela細(xì)胞相比，差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.149)。與空載體組和陰性對(duì)照組相比，mda-7組的Hela細(xì)胞的體外增殖最慢，而空載體組和陰性對(duì)照組的生長(zhǎng)曲線幾乎平行。 4．Hoechs染色法空載體組和陰性對(duì)照組細(xì)胞核形態(tài)正常，而實(shí)驗(yàn)組(Mda-7組)中Hela細(xì)胞皺縮、體積變小、核固縮、邊聚形成半月小體，可見(jiàn)凋亡細(xì)胞和凋亡小體。 5．流式細(xì)胞儀法陰性對(duì)照組、空載體組和實(shí)驗(yàn)組(mda-7組)的Hela細(xì)胞

5、的早期凋亡率分別是(6.9﹪、8.13﹪、20.12﹪)。三組HeLa細(xì)胞早期凋亡率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=350.499，P<0.05)。Mda-7組的早期凋亡率分別與陰性對(duì)照組、空載體組相比較，差異具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。陰性對(duì)照組和空載體組的凋亡率比較，差異無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.053)。 結(jié)論: 1．穩(wěn)定轉(zhuǎn)染mda-7基因的宮頸癌Hela細(xì)胞體外生長(zhǎng)受限。 2．Mda-7基因?qū)m