壽胎丸對自然流產患者滋養(yǎng)層細胞凋亡蛋白表達的影響.pdf

1、目的：
　　自然流產(Spontaneous abortion，SA)是妊娠常見并發(fā)癥，按自然流產發(fā)展的不同階段，可分為先兆流產、難免流產、不全流產、完全流產。對自然流產患者及時有效的治療，可進一步影響妊娠結局。故自然流產預防及治療所展開的研究具有一定的社會意義。清代醫(yī)家張錫純在《醫(yī)學衷中參西錄》創(chuàng)立的壽胎丸方現(xiàn)廣泛用于自然流產的防治。前期實驗研究發(fā)現(xiàn)壽胎丸含藥血清呈劑量依賴性地增強自然流產患者滋養(yǎng)層細胞的增殖活性、侵襲遷移力，減

2、少細胞凋亡。基于此，本課題探討壽胎丸含藥血清對自然流產患者滋養(yǎng)層細胞凋亡及凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Fas、FasL、Survivin表達的影響，以期進一步探討壽胎丸防治自然流產作用機制及其作用靶點。
　　方法：
　　1、將36只SPF級雌性SD大鼠隨機分為3組，分別予壽胎丸水煎液（6.25g/kg）、地屈孕酮水溶液（2.08mg/kg）、等量生理鹽水灌胃，制備壽胎丸含藥血清、地屈孕酮含藥血清及空白血清。
　　2、體

3、外分離培養(yǎng)正常妊娠人工流產者及難免流產患者滋養(yǎng)層細胞(Trophoblastic cells，TB)，采用免疫細胞化學法檢測貼壁細胞中細胞角蛋白（Cytokeratin-7，CK-7）和波形蛋白(Vimentin)表達，證實為滋養(yǎng)層細胞后進行后續(xù)實驗。
　　3、不同濃度(5％、10％、20％)壽胎丸含藥血清干預自然流產患者滋養(yǎng)層細胞，空白血清及地屈孕酮含藥血清分別作為空白對照及陽性對照。
　　4、采用流式細胞術(Flow c

4、ytometry,FCM)檢測各組滋養(yǎng)層細胞凋亡情況。
　　5、采用蛋白質免疫印跡法（Western blot）檢測各組凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax、Fas、FasL、Survivin表達的差異并分析其相關性。
　　6、統(tǒng)計學方法：采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件進行分析，計量資料以((x)±s)表示。根據實驗設計的不同采用不同統(tǒng)計方法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1、與正常對照組比較，自

5、然流產患者滋養(yǎng)層細胞早期凋亡、總凋亡比例明顯升高（P＜0.05）。
　　2、與正常對照組相比，自然流產患者滋養(yǎng)層細胞Bcl-2、Survivin蛋白表達量減少，F(xiàn)as、FasL、Bax蛋白表達量增多(P＜0.01)。
　　3、與空白血清對照組相比，壽胎丸含藥血清、地屈孕酮含藥血清能降低自然流產患者滋養(yǎng)層細胞早期凋亡、總凋亡比例(P＜0.01)。
　　4、與空白血清對照組相比，壽胎丸含藥血清、地屈孕酮含藥血清能上調Bcl

6、-2、Survivin蛋白水平，下調Fas、FasL、Bax蛋白水平(P＜0.01)。
　　5、壽胎丸含藥血清對自然流產患者滋養(yǎng)層細胞凋亡及凋亡蛋白的影響呈劑量依賴性（P＜0.05）。
　　6、Bcl-2與Survivin存在密切的正相關關系，Bax、Fas、FasL與Survivin存在密切的負相關關系（P＜0.01）。
　　結論：
　　壽胎丸含藥血清呈劑量依賴性減少自然流產患者滋養(yǎng)層細胞凋亡，上調Bcl-2、