不同細胞滋養(yǎng)層對人角朊細胞體外培養(yǎng)的影響.pdf

1、目前,在燒傷創(chuàng)面治療中取自體皮片移植仍是最主要的方法,對于大面積燒傷患者來說自體皮源遠遠不能滿足臨床需求,組織工程技術的發(fā)展使體外培養(yǎng)人表皮細胞的技術不斷得以完善,自體皮膚(主要是角朊細胞)體外快速擴增為燒傷治療提供了廣闊的前景.經(jīng)典的角朊細胞培養(yǎng)方法以放射線處理的3T3細胞作為滋養(yǎng)層,以FAD作為培養(yǎng)基,角朊細胞體外培養(yǎng)周期一般需要2周,不能及時滿足臨床需要.該實驗研究的目的即對傳統(tǒng)的人角朊細胞體外培養(yǎng)方法進行研究及改進,利用絲裂霉素

2、處理的3T3細胞和人成纖維細胞分別作為滋養(yǎng)層,比較人角朊細胞在兩種細胞滋養(yǎng)層上體外培養(yǎng)融合的周期,以期找到能使人皮膚角朊細胞體外培養(yǎng)更快融合的培養(yǎng)體系.探索和尋找人角朊細胞體外培養(yǎng)適宜的滋養(yǎng)層細胞,完善人角朊細胞體外培養(yǎng)快速擴增的技術和方法.該實驗分別在3T3細胞、原代培養(yǎng)的人成纖維細胞上接種原代人角朊細胞,并設無滋養(yǎng)層細胞的空白對照.通過角朊細胞在不同滋養(yǎng)層上貼壁生長及融合時間的觀察,確定適合角朊細胞生長的最佳細胞滋養(yǎng)層.在對不同滋養(yǎng)

3、層細胞的處理上分別采用了鈷60放射線照射的傳統(tǒng)方法和絲裂霉素C處理,通過對處理前后成纖維細胞形態(tài)的改變以及存活時間的觀察,比較兩種處理方法對滋養(yǎng)層細胞生物活性的影響.我們還在絲裂霉素對同一個體相同代數(shù)人成纖維細胞適宜的作用濃度方面進行了研究,設計了3個實驗濃度的絲裂霉素C(5 μg/ml、1 0 μ g/ml、1 5μg/ml),分別處理人成纖維細胞及3T3細胞,以處理后細胞失去增殖能力為標準,確定適宜的作用濃度.并對處理后成纖維細胞的