混合體細(xì)胞滋養(yǎng)層對(duì)牛IVF胚胎培養(yǎng)的影響.pdf

1、為探討混合滋養(yǎng)層對(duì)牛的IVF胚胎在體外發(fā)育的影響，本試驗(yàn)分別對(duì)胎鼠成纖維細(xì)胞、牛卵巢顆粒細(xì)胞、牛輸卵管上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法進(jìn)行了研究；同時(shí)，將三種細(xì)胞進(jìn)行了混合培養(yǎng)后，再與牛IVF胚胎共培養(yǎng)，從而研究不同的共培養(yǎng)體系對(duì)牛IVF胚胎發(fā)育的影響作用。研究結(jié)果如下：
　　1.選擇懷孕10.5d～17.5d的雌鼠，按試驗(yàn)分組(10.5-12.5d、13.5-14.5d、15.5-17.5d)分別獲取不同胎齡胎鼠，同等條件下研究胎鼠成纖維細(xì)胞

2、的最佳分離時(shí)間；分別用不用濃度（0.025％、0.05％、0.125％和0.25％）的胰蛋白酶于室溫條件下對(duì)胎鼠組織進(jìn)行消化，觀察不同酶濃度對(duì)分離原代 MEF的影響。結(jié)果表明：用胎齡13.5-14.5d的胎鼠來培養(yǎng)成纖維細(xì)胞效果最好；采用0.125％胰蛋白酶消化8-11 min對(duì)細(xì)胞的損傷較小，傳代之后細(xì)胞的生長速度較快。
　　2.在37℃條件下，將第3代顆粒細(xì)胞采用三種不同的消化方式進(jìn)行消化傳代：0.25％胰蛋白酶、0.02％E

3、DTA、TE(0.25％胰蛋白酶+0.02％EDTA)混合進(jìn)行消化傳代，統(tǒng)計(jì)不同消化方式的細(xì)胞貼壁率；相同的條件下，分別采用刮取法、組織塊法及消化法對(duì)輸卵管進(jìn)行處理，觀察比較不同的獲取方法對(duì)原代細(xì)胞培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明，TE組細(xì)胞在12h和24h的貼壁率均高于其他兩組（P<0.05），效果最好；通過刮取法獲取的輸卵管上皮細(xì)胞培養(yǎng)效果優(yōu)于組織塊法和消化法。
　　3.將胎鼠成纖維細(xì)胞、牛卵巢顆粒細(xì)胞和牛輸卵管上皮細(xì)胞分別按照1:1的比

4、例進(jìn)行混合培養(yǎng)，研究混合培養(yǎng)細(xì)胞的貼壁率及臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定其存活率。結(jié)果表明：GC-BOEC組在12h、24h的貼壁率及細(xì)胞活率都顯著高于其他兩組(P<0.05)。
　　4.將 COCs經(jīng)體外培養(yǎng)成熟后，按相同的方法進(jìn)行體外受精，精卵共孵12h后隨機(jī)將假定受精卵分別移入含有不同體細(xì)胞的培養(yǎng)體系中進(jìn)行共培養(yǎng)（GC組、BOEC組、GC-BOEC組、對(duì)照組）。結(jié)果：各個(gè)實(shí)驗(yàn)組之間卵裂率無顯著差異；GC-BOEC組的桑葚胚率（43.1％）顯