核酸序列依賴擴增聯合酶聯免疫試驗檢測侵襲性曲霉菌的實驗研究.pdf

1、目的：
　　侵襲性曲霉菌感染（invasive aspergillosis，IA）嚴重的威脅著免疫力低下病人的生命，早期準確的診斷與治療是良好預后的關鍵。本研究擬建立核酸序列依賴擴增聯合酶聯免疫吸附試驗（NASBA-ELISA）檢測曲霉菌的方法，并結合GM試驗和逆轉錄PCR（RT-PCR）輔助診斷侵襲性曲霉病，為其提供的最佳實驗室診斷策略。
　　方法：
　　將NASBA方法和高靈敏度的地高辛檢測系統相結合，以鏈酶親和素

2、包被的微孔板為反應平臺，采用地高辛標記 NASBA恒溫擴增曲霉菌特異性18sRNA基因片段；并用生物素標記的DNA探針雜交捕獲地高辛標記的 NASBA擴增產物，然后加入堿性磷酸酶標記的地高辛抗體和底物進行酶標顯色，并對其靈敏度、特異度進行評價。最后進行臨床驗證：收集86例 IA高?；颊叩难鍢吮?，分別用NASBA-ELISA、RT-PCR和GM試驗對其進行檢測，比較這3種方法的性能指標，并對各種可能的聯合診斷方案進行比較分析，擬找到一種

3、最佳的IA實驗室診斷方案。
　　結果：
　　成功建立NASBA-ELISA檢測曲霉菌的方法，其靈敏度可達1 Cfu，特異性良好；ELISA的光密度值（OD）與霉菌孢子量的對數存在線性相關關系（y=0.278x+0.119，R2=0.887）。NASBA-ELISA、GM及RT-PCR試驗方法的靈敏度分別為80.56%、58.33%、72.22%，特異度分別為80.00%、82.00%、84.00%。在聯合診斷時，NASBA-

4、ELISA與RT-PCR串聯方案具有最完美的特異度（100%）和陽性預測值（100%）；NASBA-ELISA和 RT-PCR并聯方案則有最好的靈敏度（94.12%）與尤登指數（0.652）。
　　結論：
　　NASBA-ELISA方法可半定量檢測曲霉菌，具有敏感性高、特異性強、操作簡便的特點，適合常規(guī)實驗室開展，為侵襲性曲霉病的早期診斷提供了一條新方法。同時與其他檢測方法進行聯合的診斷方案能夠顯著優(yōu)化診斷效能，進一步提高臨