1,25-羥基維生素D2注射用納米乳劑的研究.pdf

1、1,25-羥基維生素D2是維生素D2的合成衍生物，用于繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥(SHPT)的治療，因其較少引起高血鈣、高血磷等毒副作用而引起關(guān)注。目前上市的劑型有軟膠囊劑、注射劑。由于1,25-羥基維生素D2難溶于水，因而增大其水中溶解度成為研究的重點(diǎn)與難點(diǎn)。本研究根據(jù)藥物的理化性質(zhì)、藥理作用和靜脈注射給藥的特點(diǎn)，首次研究開(kāi)發(fā)了1,25-羥基維生素D2新型注射用納米乳劑，解決了藥物難溶于水的問(wèn)題，與現(xiàn)有的上市注射液相比，不但可以增加藥物

2、的穩(wěn)定性，而且顯著減少表面活性劑和有機(jī)溶劑的用量，從而降低毒副作用，增加臨床適用性。該注射用納米乳劑質(zhì)量可控、工藝簡(jiǎn)單、物理化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，為1,25-羥基維生素D2藥物新劑型的開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
　　在處方前研究中，根據(jù)納米乳劑的劑型特點(diǎn)及1,25-羥基維生素D2自身理化性質(zhì)，考察了1,25-羥基維生素D2在不同溶媒與油相中的溶解情況，并建立了高效液相色譜法測(cè)定1,25-羥基維生素D2的含量及有關(guān)物質(zhì)。由紫外分光光度計(jì)掃描可得，1,

3、25-羥基維生素D2在265nm有最大吸收峰，降解產(chǎn)物在274nm有最大吸收峰，最終確定265nm作為藥物含量檢測(cè)的波長(zhǎng)，274nm為有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)的波長(zhǎng)，色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠作為固定相；以乙腈-水（85:15）作為流動(dòng)相。以峰面積（A）對(duì)濃度（C）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=201098C-8412.5（R2=0.9998，n=9），說(shuō)明1,25-羥基維生素D2在0.06~4.00μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，通過(guò)回收率試

4、驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)及樣品溶液的穩(wěn)定性研究表明該方法有較高的精密度、準(zhǔn)確度及重現(xiàn)性，各輔料對(duì)主藥的檢測(cè)無(wú)干擾作用，可用于1,25-羥基維生素D2注射用納米乳劑的含量及有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定，為后續(xù)注射用納米乳劑的質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究奠定了基礎(chǔ)。
　　通過(guò)單因素試驗(yàn)考察處方中各組成成分、用量對(duì)1,25-羥基維生素D2溶解性的影響，1,25-羥基維生素D2在不同的表面活性劑、助表面活性劑、油相中的溶解性不同，篩選出1,25-羥基維生素D

5、2溶解性較大的表面活性劑、助表面活性劑及油相，繪制三元相圖篩選納米乳的形成區(qū)域，通過(guò)各處方對(duì)納米乳劑成乳效果的影響，篩選出納米乳中表面活性劑、助表面活性劑及油相的最佳配比以及制備工藝參數(shù)，再通過(guò)溶解性以及穩(wěn)定性的考察，確定最優(yōu)處方，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了處方的工藝驗(yàn)證，最終確定最優(yōu)處方以Tween80（吐溫80）作為表面活性劑、乙醇作為助表面活性劑、中鏈甘油三酯（MCT）作為油相。由于1,25-羥基維生素D2自身理化性質(zhì)，該藥氧化條件下不穩(wěn)

6、定，易氧化發(fā)生降解，應(yīng)加入抗氧劑，由穩(wěn)定性考察結(jié)果，最終確定加入2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）作為抗氧劑。
　　按照優(yōu)選處方制備注射用納米乳劑，對(duì)其含量、有關(guān)物質(zhì)、pH值、粒徑、Zeta電位、滲透壓等各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，所制備的納米乳劑的粒徑為20~50nm之間，注射用納米乳劑pH值在6~8之間，滲透壓在285~340mOsmol/Kg之間，確定注射用納米乳劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)1,25-羥基維生素D2注射用納米乳劑的穩(wěn)定性進(jìn)行

7、了初步研究，結(jié)果表明，1,25-羥基維生素D2對(duì)光照、溫度比較敏感，在光照、高溫條件下易發(fā)生降解，因此該注射用納米乳劑需在低溫、避光的條件儲(chǔ)存；模擬上市包裝的條件下，進(jìn)行了加速（25℃）6個(gè)月穩(wěn)定性考察，結(jié)果表明雜質(zhì)A（1,25-羥基維生素D2的光學(xué)異構(gòu)體）明顯增加，其他指標(biāo)均符合規(guī)定。長(zhǎng)期（4-8℃）穩(wěn)定性考察6個(gè)月，含量、有關(guān)物質(zhì)等各項(xiàng)指標(biāo)均符合規(guī)定。通過(guò)穩(wěn)定性對(duì)比研究結(jié)果表明，與上市注射液對(duì)比，注射用納米乳穩(wěn)定性更高，室溫25℃放

8、置1個(gè)月，上市注射液含量降低了3.41％，有關(guān)物質(zhì)含量升高到3.29%；注射用納米乳劑的含量降低了1.65%，有關(guān)物質(zhì)含量升高到0.98%。40℃放置10天，上市注射液含量降低了5.64%，有關(guān)物質(zhì)含量升高到5.96%；注射用納米乳劑的含量降低到3.68%，有關(guān)物質(zhì)含量升高到3.71%，可見(jiàn)注射用納米乳劑相較于上市注射液穩(wěn)定性更高。與上市注射液組成對(duì)比，上市注射液中表面活性劑為1%和助溶劑為5%，注射用納米乳劑表面活性劑僅占0.35%，

9、助溶劑僅占0.075%，降低了表面活性劑與助溶劑的使用量，提高了臨床適應(yīng)性。
　　與上市注射液對(duì)比，對(duì)注射用納米乳劑的溶血性及血管刺激性進(jìn)行體內(nèi)安全性評(píng)價(jià)。由血管刺激性試驗(yàn)結(jié)果顯示，在低中高三個(gè)劑量下，本品給藥后48h，96h后注射部位均無(wú)紅腫，充血等刺激性；上市注射液在高劑量下，血管出現(xiàn)輕微紅腫現(xiàn)象；由病理切片結(jié)果顯示，上市注射液高劑量組出現(xiàn)明顯的嗜酸性粒細(xì)胞升高現(xiàn)象，炎癥反應(yīng)明顯，血管內(nèi)皮出現(xiàn)輕微破損現(xiàn)象，證明上市注射液在高劑

10、量下對(duì)血管具有一定刺激性；而本品高劑量條件下未發(fā)現(xiàn)明顯的炎癥反應(yīng)，且血管壁完整，說(shuō)明與上市注射液相比，1,25-羥基維生素D2注射用納米乳劑可以明顯降低血管刺激性。由溶血性試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，本品無(wú)溶血性反應(yīng)。
　　綜上所述，本文將1,25-羥基維生素D2制成注射用納米乳劑，不僅提高了1,25-羥基維生素D2在水中的溶解度，且顯著減少了表面活性劑及有機(jī)溶劑的使用量，從而降低血管刺激性等毒副作用，并提高了藥物的穩(wěn)定性，本劑型制備工藝簡(jiǎn)單、