1,25-二羥維生素D3對(duì)人胃粘膜上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程的影響.pdf

1、研究背景與目的：隨著社會(huì)的進(jìn)步和經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，城市化進(jìn)程的加速和化境的污染，人們生活方式及飲食結(jié)構(gòu)的發(fā)生了明顯改變，同時(shí)疾病譜也發(fā)生了變化。盡管醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，惡性腫瘤的死亡率呈現(xiàn)逐年下降趨勢(shì),但各類(lèi)惡性腫瘤的發(fā)病率不斷上升，特別是消化系統(tǒng)惡性腫瘤，占有較大比例，如胃癌、肝癌、胰腺癌等。是威脅人類(lèi)生命的重要因素之一。據(jù)統(tǒng)計(jì),每四個(gè)死亡病例中就有一個(gè)是死于惡性腫瘤[1]。對(duì)于腫瘤的研究，發(fā)病機(jī)制是醫(yī)學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)。MNNG是由人工合成的亞

2、硝基類(lèi)化合物,替代自然界中的亞硝酰胺類(lèi)化合物,用來(lái)研究在腫瘤形成中的作用。它與胃液中亞硝基物的誘變機(jī)制相似。GES-1細(xì)胞來(lái)源于人,雖然具有永生性,但仍保留了部分正常胃粘膜的特性,如正常的骨架系統(tǒng)、粘蛋白分泌功能、停泊依賴(lài)性和裸鼠中非致瘤性等。在MNNG作用下GES-1發(fā)生了一些表型改變,如染色體畸變?cè)龆唷⒐羌芪⒔z異常、克隆形成率增加,并獲得軟瓊脂集落生成能力[2]。研究已經(jīng)證實(shí)，經(jīng)MNNG誘導(dǎo)后大部分細(xì)胞會(huì)逐漸死亡，一周左右時(shí)間,GE

3、S-1細(xì)胞將發(fā)生如染色體數(shù)目、結(jié)構(gòu)異常,基因重排，幼鼠接種后可致瘤[3]。流行病學(xué)證據(jù)表明，經(jīng)常暴露于亞硝胺類(lèi)飲食的環(huán)境中的人們，與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。亞硝胺類(lèi)物質(zhì)對(duì)人體的致癌性已成為一個(gè)全球性健康問(wèn)題[4、5]。1，25-二羥維生素D3是維生素(Vit)D3經(jīng)肝、腎代謝后的主要活性形式,有著重要的生物活性,其生物效應(yīng)是由VitD受體(VDR)介導(dǎo)的。近年來(lái)隨著國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)1，25-二羥維生素D3的研究不斷深入,發(fā)現(xiàn)除了維持體內(nèi)鈣環(huán)

4、境相對(duì)穩(wěn)定外,還具有調(diào)節(jié)免疫、抑制腫瘤細(xì)胞增殖等十分廣泛的作用，1，25-二羥維生素D3具有一定的防癌及抗癌活性,對(duì)乳腺癌、肺癌等具有較好的治療作用[6-7]。
　　本實(shí)驗(yàn)是通過(guò)將體外培養(yǎng)的人胃粘膜上皮細(xì)胞系（GES-1），經(jīng)化學(xué)致癌劑N-甲基-N-硝基-N-亞硝基胍（MNNG)誘導(dǎo)使細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，研究1，25-二羥維生素D3(骨化三醇)在經(jīng)MNNG惡性轉(zhuǎn)化的過(guò)程中對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡及Shh、Gli1基因表達(dá)的產(chǎn)生的影響，以便為癌變

5、的機(jī)制和預(yù)防提供理論依據(jù)。
　　方法
　　1.分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組和GES-1組。MNNG誘導(dǎo)的GES-1細(xì)胞（對(duì)照組），誘導(dǎo)后給予不同濃度（10-6、10-7、10-8、10-9mmol/L）1，25-二羥維生素D3進(jìn)行干預(yù)（實(shí)驗(yàn)組）。
　　2.采取四甲基固氮唑鹽（MTT）檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞增殖并確定實(shí)驗(yàn)組最佳藥物濃度。
　　3.流式細(xì)胞儀（flowcytometry）檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率。
　　4.R

6、T-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞Shh、Gli1mRNA基因的表達(dá)。
　　結(jié)果
　　MTT法顯示，對(duì)照組細(xì)胞出現(xiàn)大量死亡，實(shí)驗(yàn)組給予10-6、10-7、10-8、10-9mol/L的1，25-二羥維生素D3干預(yù)后存活細(xì)胞較對(duì)照組增多（P＜0.05）。取最佳藥物作用濃度10-6mol/L為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組及GES-1細(xì)胞組，F(xiàn)CM測(cè)各組細(xì)胞7d的凋亡率。分別為實(shí)驗(yàn)組(44.73±2.04)％、對(duì)照組(85.23±2.08)%、GES-1細(xì)

7、胞組(4.9±0.91)%，與對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡明顯減少（P＜0.05）。RT-PCR顯示ShhmRNA實(shí)驗(yàn)組（0.6747±0.0116）、對(duì)照組(0.6616±0.0095)均表達(dá)（P>0.05），Gli1mRNA實(shí)驗(yàn)組（0.3382±0.0150）表達(dá)低于對(duì)照組（0.5328±0.0115）(p<0.05)。
　　結(jié)論
　　1，25-二羥維生素D3有阻止GES-1細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的作用，從而可達(dá)到延緩或阻止細(xì)胞惡變的