蛋氨酸對熱處理下體外培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細胞增殖、凋亡及相關(guān)基因表達的影響.pdf

1、本試驗通過對不同濃度蛋氨酸作用于熱處理后的體外培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細胞進行研究，測定其對乳腺上皮細胞增殖、抗氧化性、凋亡及相關(guān)基因與蛋白表達方面的影響，從細胞水平探討蛋氨酸對熱應(yīng)激下奶牛乳腺的保護作用。本試驗分為兩個部分:
　　1、蛋氨酸對熱處理及非熱處理奶牛乳腺上皮細胞增殖、抗氧化性能的影響。
　　用兩組含不同濃度(0、30、60mg/L)蛋氨酸的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞2d后，37℃組用37℃水浴0.5h，42℃組（熱處理組）

2、42℃水浴0.5h，恢復(fù)6h，通過MTT測定高溫?zé)崽幚韺w外培養(yǎng)乳腺上皮細胞增殖的影響，培養(yǎng)液中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(AT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性以及細胞凋亡率。結(jié)果表明，與37℃組相比，42℃組MDA含量、NO含量、NOS活力、LDH活性均升高;細胞活力、SOD活性、CAT活性下降，GSH-Px酶活力升高。與0mg/L

3、蛋氨酸組相比，添加60mg/L蛋氨酸組的細胞活力升高(P＜0.05);LDH活性顯著降低(P＜0.05);尤其MDA、NO、NOS含量極顯著降低(P＜0.01);添加30mg/L、60mg/L蛋氨酸能增加熱處理下乳腺上皮細胞CAT活性(P＜0.05);SOD中，60mg/L蛋氨酸組含量最高（P＜0.05）;培養(yǎng)液中GSH-Px活性，60mg/L蛋氨酸組最高(P＜0.01)。這說明42℃0.5h熱處理使細胞產(chǎn)生了熱應(yīng)激，細胞受到氧化應(yīng)激，

4、有氧自由基含量上升。添加蛋氨酸可以有效緩解細胞熱應(yīng)激損傷，減少氧化應(yīng)激。
　　2、蛋氨酸對熱處理及非熱處理乳腺上皮細胞凋亡、相關(guān)基因及蛋白表達的影響。
　　用含不同濃度(0、30、60mg/L)蛋氨酸的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞2d后，42℃水浴0.5h后立即放回37℃恢復(fù)培養(yǎng)6h，測定細胞凋亡、HSF-1 mRNA、HSP70mRNA、Bax/Bcl-2mRNA的表達、HSP70蛋白的表達以及Caspase-3的活性。結(jié)果表明

5、，流式細胞儀測定細胞凋亡，與0mg/L蛋氨酸組相比，添加30、60mg/L蛋氨酸能顯著降低細胞晚期凋亡/壞死率(P＜0.05)，總死亡率差異極顯著(P＜0.01);60mg/L蛋氨酸組HSF-1mRNA、HSP70mRNA表達量、HSP70蛋白的表達顯著升高(P＜0.01);降低了Bax/Bcl-2mRNA的表達量以及Caspase-3的活性(P＜0.01)。結(jié)論:培養(yǎng)基中添加60mg/L蛋氨酸能促進高溫條件下乳腺上皮細胞增殖，起到抗凋