谷氨酰胺對奶牛乳腺上皮細胞生長與增殖及HSP70表達的影響.pdf

1、本試驗用不同劑量的谷氨酰胺（Gln）體外培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細胞，分別檢測在正常培養(yǎng)溫度和高溫應激條件下細胞的生長、增殖情況及HSP70 mRNA的表達水平，旨在探討不同劑量的Gln對體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細胞生長、增殖、減緩應激損傷的作用及其與細胞HSP70 mRNA的表達的關系.本研究分為兩個部分：
　　 一、不同濃度的谷氨酰胺對奶牛乳腺上皮細胞生長與增殖及HSP70 mRNA表達的影響
　　 收集37℃，細胞培養(yǎng)基中G

2、ln添加劑量依次為0，0.0625，0.25，0.5，2，4，8mmol/L的奶牛乳腺上皮細胞及細胞培養(yǎng)液，利用MTT法檢測細胞增殖，比色法檢測乳酸脫氫酶（LDH）活性，RT-PCR分析Bcl-2/Bax及HSP70 mRNA的表達量。進而研究Gln對體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細胞生長、增殖的作用及其與熱休克蛋白（HSP）70表達的關系。本研究結果表明，體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細胞其活性受Gln添加劑量的影響。Gln添加劑量為2 mmol/L

3、時，檢測的細胞增殖能力最強，Bcl-2/Bax mRNA表達量比值最高，說明此添加劑量細胞活性最好。Gln對體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細胞HsP70 mRNA的表達有誘導作用，這種作用隨Gln劑量的增加而增加。
　　 二、高溫應激條件下谷氨酰胺對奶牛乳腺上皮細胞生長與增殖及HSP70 mRNA表達的影響
　　 本試驗對乳腺上皮細胞進行37℃、39℃、41℃、43℃四個不同溫度處理，根據(jù)細胞應激損傷程度篩選出熱應激溫度；對細胞

4、進行0～8 mmol/L不同劑量Gln預處理，再施加41℃高溫處理，分別檢測細胞的生長增殖情況及HSP70 mRNA的表達量。旨在探討不同溫度對細胞的損傷情況和在高溫應激條件下Gln對細胞生長、增殖、減緩應激損傷的作用，及誘導表達的HSP70對細胞應激損傷的作用。結果表明，以37℃培養(yǎng)條件為對照組，隨著處理溫度的增加細胞的凋亡率顯著增加，其中以43℃最顯著，41℃次之，39℃最輕。在41℃條件下，Gln添加劑量為0～0.25 mmol/