牛乳腺上皮細(xì)胞的體外分離與培養(yǎng).pdf

1、為研究牛乳腺上皮細(xì)胞(BMEC)增殖和分化特性及為生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物創(chuàng)造條件,建立了適合BMEC體外增殖的培養(yǎng)體系.基礎(chǔ)培養(yǎng)液用DMEM/F12,含胎牛血清100mL,青霉素0.05g/L及鏈霉素0.05g/L.在此基礎(chǔ)上,以不同的組合分別添加胰島素轉(zhuǎn)鐵蛋白硒鈉(10mL/L),17 β-雌二醇(5mg/L),氫化可的松(5mg/L),表皮生長因子(20ug/L),配成A<,1>,A<,2>,A<,3>,A<,4>4種不同的培養(yǎng)液.從細(xì)胞形

2、態(tài)、細(xì)胞群體倍增時間、細(xì)胞生長曲線等方面考察了不同生長因子對BMEC的促生長作用.通過有效的細(xì)胞培養(yǎng)方法獲得牛乳腺上皮細(xì)胞系,系統(tǒng)觀察了乳腺上皮細(xì)胞的長出、貼壁、聚集、遷移、分裂、分化、調(diào)亡等一系列形態(tài)變化.其結(jié)果如下:1.胰島素轉(zhuǎn)鐵蛋白硒鈉(ITS)是原代培養(yǎng)和傳代BMEC所必需的;表皮生長因子(EGF)可以明顯促進(jìn)BMEC的生長增殖.在該培養(yǎng)體系中,BMEC的原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)均不需要生長基質(zhì)的作用.2.細(xì)胞生長曲線表明,傳代培養(yǎng)的

3、乳腺上皮細(xì)胞在接種后有2d的滯留期,之后為對數(shù)生長期,持續(xù)4d左右,第7d進(jìn)入平臺期.3.BMEC的適宜凍存液為DMEM/F<,12>,添加30%FCS和10%的二甲基亞砜(DMSO),適宜的冷凍降溫方法是以-1℃/min的速度從4℃降至-25℃,30min后投入液氮進(jìn)行低溫保存.4.用含胰島素轉(zhuǎn)鐵蛋白硒鈉、氫化可的松、孕羊血清的DMEM/F12做為細(xì)胞分化誘導(dǎo)液,誘導(dǎo)BMEC分化,用間接ELISA法進(jìn)行BMEC的酪蛋白分泌的檢測.結(jié)果