血漿尿嘧啶核苷測(cè)定方法的建立及胞磷膽堿鈉片生物等效性研究.pdf

1、目的：1.建立測(cè)定人血漿中尿嘧啶核苷濃度的高效液相色譜法；2.進(jìn)行試驗(yàn)制劑胞磷膽堿鈉腸溶片與市售參比制劑胞磷膽堿鈉膠囊的單劑口服雙交叉兩周期人體生物等效性試驗(yàn)，評(píng)價(jià)兩制劑的生物等效性，為新藥報(bào)批及其臨床應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：1.色譜條件：色譜柱為Phenomenex kinetex C18(100×4.6mm，2.6μm)；流動(dòng)相：0.05 M磷酸鹽緩沖液(1000 mL水中加入磷酸二氫鉀6.8044 g，用磷酸調(diào)至p

2、H3.5)：甲醇(98:2)；流速：0.8 mL·min-1；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：260 nm；進(jìn)樣量：20μL。選用阿莫西林作為內(nèi)標(biāo)。
　　 2.胞磷膽堿鈉片在健康志愿者體內(nèi)的生物等效性研究，24名健康男性志愿者按體重排序后隨機(jī)分為兩組，于試驗(yàn)前一天晚10時(shí)后禁食，試驗(yàn)當(dāng)日晨抽取空白血樣后，立即空腹口服試驗(yàn)制劑(胞磷膽堿鈉腸溶片)或參比制劑(胞磷膽堿鈉膠囊)600 mg，于給藥前和給藥后0.5、1.0、1.5、2.0、3.

3、0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0 h取肘靜脈血4 mL，立即移入肝素抗凝管中，靜置，4℃5000 rpm低溫離心5min，取血漿分雙份于-20℃貯存?zhèn)錅y(cè)。一周后交叉重復(fù)上述試驗(yàn)。
　　 3.采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定胞磷膽堿鈉代謝產(chǎn)物尿嘧啶核苷經(jīng)時(shí)血濃度。尿嘧啶核苷血濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)經(jīng)《DAS2.0》實(shí)用藥代動(dòng)力學(xué)計(jì)算程序處理，得試驗(yàn)制劑和參比制劑胞磷膽堿鈉代謝產(chǎn)物尿嘧啶核苷藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)；根據(jù)試驗(yàn)制

4、劑和參比制劑AUC0-t計(jì)算試驗(yàn)制劑的相對(duì)生物利用度。同時(shí)對(duì)主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行方差分析、雙單側(cè)t檢驗(yàn)和(1-2α)置信區(qū)間分析，評(píng)價(jià)試驗(yàn)制劑和參比制劑的生物等效性。
　　 結(jié)果：1.血漿中尿嘧啶核苷的最低檢測(cè)限低于50 ng·mL-1，該方法在0.05～2μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=2.10X+0.57(r=0.9928，n=7)，低、中、高濃度(0.1μg·mL-1，0.5μg·mL-1和1.6μg·m

5、L-1)尿嘧啶核苷和內(nèi)標(biāo)(10μg·mL-1)的提取回收率分別為99.66％、102.09％、95.57％和81.52％；低、中、高濃度尿嘧啶核苷血漿樣品的日內(nèi)、日間變異(RSD)均小于15％，血漿樣品室溫放置8h，長(zhǎng)期冷凍7天、14天，反復(fù)凍融2次穩(wěn)定性良好。
　　 2.單劑量口服胞磷膽堿鈉實(shí)驗(yàn)制劑和參比制劑后，血漿尿嘧啶核苷的Cmax分別為(1.956±0.402)μg·mL-1和(2.070±0.619)μg·mL-1，t

6、1/2分別為(4.393±2.526)h和(4.857±4.503)h，Tmax分別為(3.354±1.118)h和(3.688±1.082)h，AUC0-t分別為(12.774±3.222)μg·mL-1·h和(13.992±3.953)μg·mL-1·h，AUC0～∞分別為(16.015±5.647)μg·mL-1·h和(17.198±6.672)μg·mL-1·h。
　　 結(jié)論：1.建立的測(cè)定人血漿中尿嘧啶核苷濃度的高效液