大鼠不同部位來源脂肪源性干細胞的增殖能力比較及CM-Dil體外標記研究.pdf

1、目的:
　　 觀察比較SD大鼠不同部位脂肪源性干細胞體外培養(yǎng)的增殖能力;探討熒光性染料CM-Dil體外標記ADSC的可行性與時效性。
　　 方法:
　　 無菌條件下依次切取SD大鼠腹股溝區(qū)、附睪區(qū)脂肪組織，Ⅰ型膠原酶消化獲取脂肪源性干細胞，體外行差速貼壁培養(yǎng)傳代。觀察腹股溝區(qū)（A組）與附睪區(qū)（B組）單位體積(1ml)脂肪相同方法下提取的干細胞數(shù)量、細胞生長繁殖情況及形態(tài)變化，繪制各自生長曲線。取匯合至80％的第三

2、代(P3)附睪來源脂肪源性干細胞，分為實驗組（a、b、c組）和對照組（d組）。各實驗組使用不同濃度的CM-Dil標記液體外標記ADSC，分別為a組(20μg/ml)、b組（30μg/ml）、c組（40μg/ml）?？瞻讓φ战M（d組）無CM-Dil標記及其他特殊處理，體外行差速貼壁培養(yǎng)并傳代。觀察并比較兩組細胞形態(tài)，繪制各實驗組與對照組的細胞生長曲線，計算a、b、c三組細胞24小時的標記率，分析此標記方法的可行性。觀察期限25天，計算不同

3、時間點a、b、c組細胞的標記率，組組間進行統(tǒng)計學分析，探討其時效性。
　　 結(jié)果:
　　 ①在倒置相差顯微鏡下觀察，A、B兩組脂肪源性干細胞均呈短小梭形，隨培養(yǎng)時間延長，細胞逐漸變得細長，兩者的細胞形態(tài)均與成纖維細胞相似;②同樣消化方法下獲取的A組（腹股溝區(qū)）細胞數(shù)量為（1.03±0.19）×103個，B組（附睪區(qū)）細胞數(shù)量為（2.08±0.15）×103，兩者存在顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.05);③A、B兩組ADSC的生

4、長曲線均呈“S”形，B組（附睪區(qū)）ADSC的的增殖能力高于A組（腹股溝區(qū)）;④不同濃度CM-Dil標記液(a組:20μg/ml、b組:30μg/ml、c組:40μg/ml）24h的標記率分別為:（98.16±0.31）％、（98.93±0.77）％、（98.09±0.50）％，組組間無顯著統(tǒng)計學差異(P＞0.05);⑤實驗組(20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml)與對照組的細胞生長曲線均呈“S”形，其中20μg/ml和30μg

5、/ml的標記濃度對細胞的增殖能力及活力無明顯影響。⑥細胞傳至第8代(25d)時，c組(40μg/ml)的陽性標記率仍可達到（74.37±1.68）％，與a組（20μg/ml）標記率（67.59±2.53％）存在顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、大鼠附睪區(qū)脂肪組織所含ADSC在獲取數(shù)量、細胞活力、體外增殖能力方面要優(yōu)于腹股溝區(qū)ADSC，可作為種子細胞來源的理想供區(qū)。
　　 2、采用CM-Di