不同年齡人群脂肪干細(xì)胞體外成脂、成骨誘導(dǎo)分化能力的比較.pdf

1、目前，國(guó)內(nèi)外很多研究結(jié)果均顯示，在脂肪組織中同樣存在具有多向分化潛能的基質(zhì)干細(xì)胞。由于骨髓組織來(lái)源的干細(xì)胞獲取來(lái)源有限、獲得困難等不利因素，限制了其應(yīng)用。而脂肪組織來(lái)源的干細(xì)胞作為一種干細(xì)胞的新來(lái)源，具有一定的潛在的優(yōu)越性。使得脂肪干細(xì)胞的研究迅速成為研究的新熱點(diǎn)。隨著研究的深入，各種更細(xì)節(jié)的問(wèn)題都將會(huì)被考慮。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)于不同年齡人群的脂肪干細(xì)胞成脂、成骨能力是否存在差異尚無(wú)統(tǒng)一認(rèn)識(shí)。本實(shí)驗(yàn)在于觀察年齡對(duì)人脂肪干細(xì)胞體外成脂、成骨分

2、化的影響，為脂肪干細(xì)胞的進(jìn)一步應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1.分三組：兒童(<14歲)(n=5)、成年(30-35歲)(n=5)、老年(>60歲)(n=5)。 2.采用第3代ADSCs細(xì)胞，以105/孔接種于6孔板，待其生長(zhǎng)融合后，于普通培養(yǎng)液中分別加入成脂誘導(dǎo)劑進(jìn)行培養(yǎng)。成脂誘導(dǎo)2周后進(jìn)行油紅0染色檢測(cè)，染色后脂滴所占的面積百分比采用圖像分析軟件(Image—ProPlus，美國(guó))進(jìn)行定量分析。 3.同

3、樣采用第3代ADSCs細(xì)胞，以105/孔接種于6孔板，待其生長(zhǎng)融合后，于普通培養(yǎng)液中分別加入成骨誘導(dǎo)劑進(jìn)行培養(yǎng)。成骨誘導(dǎo)2周后進(jìn)行堿性磷酸酶的定量檢測(cè)。得到各個(gè)標(biāo)本細(xì)胞的堿性磷酸酶數(shù)值，再計(jì)算各年齡組的堿性磷酸酶數(shù)值。成骨誘導(dǎo)4周后進(jìn)行von Kossa染色。采用圖像處理軟件(Image——ProPlus，美國(guó))對(duì)染色后鈣化面積進(jìn)行定量分析。 結(jié)果： 1.細(xì)胞接種48小時(shí)后大部分細(xì)胞已貼壁生長(zhǎng)，并開(kāi)始伸展，呈成纖維細(xì)胞樣

4、梭形，6-7天基本融合，傳代細(xì)胞穩(wěn)定。 2.細(xì)胞經(jīng)成脂誘導(dǎo)后形態(tài)發(fā)生變化，由長(zhǎng)梭形變成不規(guī)則的圓型，胞漿中可見(jiàn)大小不等的脂滴，有的相互融合，形成較大的脂滴。油紅0染色顯示紅色的脂滴，圖像分析軟件顯示各組成脂情況存在一定的差異，老年組成脂水平均低于兒童組及成年組。 3.細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)后由長(zhǎng)梭形變?yōu)楸鈭A型，2周時(shí)行堿性磷酸酶定量檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞著色呈粉紅或紫紅色，各組定量結(jié)果顯示年齡增加其成骨能力下降。4周時(shí)進(jìn)行von Kos