大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源心室肌樣活細(xì)胞的體外誘導(dǎo)及其特異標(biāo)記的研究.pdf

1、該課題以成年Wistar大鼠骨髓MSCs為研究對(duì)象,著重探討了骨髓MSCs在5-氮胞苷誘導(dǎo)下向心室肌樣細(xì)胞分化的可行性及其可能機(jī)理,利用心室肌特異的MLC-2v啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的EGFP特異標(biāo)記了骨髓MSCs分化的心室肌樣細(xì)胞,為進(jìn)一步篩選和研究骨髓MSCs來(lái)源心室肌樣活細(xì)胞奠定了基礎(chǔ).由以上結(jié)果可得出以下結(jié)論:1、大鼠骨髓MSCs在5-氮胞苷(10μM)誘導(dǎo)后開(kāi)始,具有肌管形成細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)的桿狀或球狀細(xì)胞的出現(xiàn),胚胎型心肌特有的actin-

2、a和心室肌特有的MLC-2v結(jié)構(gòu)蛋白,功能性受體β<,1>-腎上腺素受體(β<,1>-AR),β<,2>-AR和心肌細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子NKx2.5/csx,GATA4,MEF-2D的表達(dá),證實(shí)了MSCs大鼠能在體外分化為包括心室肌樣細(xì)胞在內(nèi)的心肌樣細(xì)胞.2、5-氮胞苷(10μM)誘導(dǎo)分化過(guò)程中MSCs內(nèi)心肌細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子NKx2.5/csx,GATA4,MEF-2D的表達(dá)增高也提示它們可能參與MSCs向心肌樣細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)錄調(diào)控.

3、3、轉(zhuǎn)染pMLC-EGFP的MSCs與未轉(zhuǎn)染者的生長(zhǎng)曲線相似,MSCs在5-氮胞苷(10μM)誘導(dǎo)后1W開(kāi)始表達(dá)EGFP和MLC-2v,不但表明pMLC-EGFP轉(zhuǎn)染并不明顯影響MSCs的生長(zhǎng)和向心室肌樣細(xì)胞分化的能力,MLC-2v啟動(dòng)子的活性足以驅(qū)動(dòng)EGFP的表達(dá),而且說(shuō)明諸如EGFP等外源性基因可以在MSCs中表達(dá).4、Cy3偶聯(lián)的MLC-2v和EGFP在已轉(zhuǎn)染的MSCs內(nèi)的共表達(dá)和表達(dá)時(shí)相的一致性證實(shí)EGFP在MLC-2v啟動(dòng)子驅(qū)