超小超順磁性氧化鐵(USPIO)標(biāo)記SD大鼠脂肪來源干細(xì)胞(ADSCs)體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：利用超小超順磁性氧化鐵顆粒（USPIO）標(biāo)記SD大鼠脂肪來源干細(xì)胞（ADSCs），探討標(biāo)記的有效性及安全性，并從體外和體內(nèi)水平探究MR對(duì)標(biāo)記細(xì)胞進(jìn)行成像示蹤的可行性。
　　 方法：使用含USPIO（40μg/ml）和多聚賴氨酸（PLL，1.5μg/ml）的培養(yǎng)基與ADSCs共孵育培養(yǎng)24h，標(biāo)記后行普魯士藍(lán)染色和透射電鏡觀察鐵顆粒在細(xì)胞內(nèi)的分布，行臺(tái)盼藍(lán)染色和MTS實(shí)驗(yàn)測(cè)定標(biāo)記對(duì)細(xì)胞活力和增殖能力的影響，應(yīng)用ELISA法比

2、較標(biāo)記細(xì)胞和對(duì)照組培養(yǎng)液中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）含量。體外條件下，通過T2 map和T2*map序列研究不同數(shù)量標(biāo)記細(xì)胞與MR信號(hào)參數(shù)（T2、T2*、R2和R2*）之間相關(guān)性?；铙w條件下，開胸結(jié)扎冠脈前降支（LAD）建立SD大鼠急性心梗模型，通過尾靜脈和心肌局部注射分別移植標(biāo)記細(xì)胞，利用MR進(jìn)行標(biāo)記細(xì)胞的活體示蹤成像。取病理行普魯士藍(lán)染色觀察USPIO顆粒在各臟器分布情況。
　　 結(jié)果：體外普魯士藍(lán)染色顯示USPIO標(biāo)記A

3、DSCs的陽性率為99％，透射電鏡提示USPIO顆粒主要位于胞質(zhì)內(nèi)溶酶體中。臺(tái)盼藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)顯示活細(xì)胞數(shù)大于95％，MTS實(shí)驗(yàn)提示USPIO濃度為10、20、40、80和160μg/ml時(shí)不影響ADSCs增殖。ELISA法顯示標(biāo)記細(xì)胞和對(duì)照組培養(yǎng)液中VEGF含量與細(xì)胞數(shù)量呈正相關(guān)，組間無顯著差異。體外MR成像可敏感顯示USPIO標(biāo)記細(xì)胞，通T2 map序列及T2*map序列可以進(jìn)行T2和T2*定量測(cè)量，R2和R2*值與標(biāo)記細(xì)胞數(shù)量之間呈線

4、性相關(guān)。呼吸機(jī)輔助通氣條件下通過開胸結(jié)扎冠脈前降支（LAD）可成功建立SD大鼠急性心梗模型。尾靜脈途徑移植標(biāo)記細(xì)胞可在肝臟首先觀察到信號(hào)強(qiáng)度減低，心肌信號(hào)強(qiáng)度無顯著改變；通過心肌直接注射標(biāo)記細(xì)胞可在MR觀察到注射區(qū)域信號(hào)強(qiáng)度明顯降低。普魯士藍(lán)染色提示兩種標(biāo)記途徑可在梗死心肌附近發(fā)現(xiàn)局灶性分布的USPIO顆粒，但大部分顆粒分布于脾臟中。
　　 結(jié)論：
　　 1、使用USPIO（40μg/ml）和PLL（1.5μg/ml）可