體外擴(kuò)增培養(yǎng)對兔脂肪來源干細(xì)胞衰老及成骨分化能力的影響.pdf

1、前言：
　　臨床上因先天畸形、創(chuàng)傷及腫瘤等原因造成的顱頜面部骨性缺損，大大降低了患者的生活質(zhì)量，骨缺損的重建是亟待解決的問題。骨的組織工程的出現(xiàn)為骨缺損的修復(fù)開辟了一條新道路。自2001年Zuk等人首次發(fā)現(xiàn)脂肪來源的干細(xì)胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)后，ADSCs便成為了骨組織工程學(xué)研究中理想的種子細(xì)胞之一。但是，關(guān)于體外擴(kuò)增培養(yǎng)即長期傳代是否會對ADSCs的成骨分化能力產(chǎn)生影響，學(xué)者們尚未

2、達(dá)成共識。本實(shí)驗(yàn)探討體外擴(kuò)增培養(yǎng)對兔ADSCs衰老及成骨分化能力的影響，以期為基礎(chǔ)研究及臨床應(yīng)用提供理論支持。
　　實(shí)驗(yàn)材料和方法：
　　1、兔ADSCs的分離、提取及培養(yǎng)。
　　2、第3代的兔ADSCs體外成脂誘導(dǎo)分化及成骨誘導(dǎo)分化。
　　3、分別取第5代、10代、15代兔ADSCs進(jìn)行體外成骨誘導(dǎo)分化，并于每組代數(shù)成骨誘導(dǎo)的第1、2、3、4周進(jìn)行茜素紅染色及茜素紅半定量測定細(xì)胞外基質(zhì)鈣鹽沉積。
　　4、

3、分別取第5代、10代、15代兔ADSCs進(jìn)行β-半乳糖苷酶染色檢測細(xì)胞衰老。
　　5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩組間比較采用Dunnett-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1、分離提取的兔ADSCs形態(tài)呈長梭形，貼壁生長。
　　2、兔ADSCs經(jīng)成脂誘導(dǎo)后形成脂肪小滴，脂肪小滴被油紅O染成紅色;經(jīng)成骨誘導(dǎo)后形

4、成礦化結(jié)節(jié)，礦化結(jié)節(jié)被茜素紅染成橘紅色。
　　3、不同代數(shù)的兔ADSCs經(jīng)成骨誘導(dǎo)后出現(xiàn)礦化結(jié)節(jié)的時間不同。傳代早期的細(xì)胞出現(xiàn)礦化結(jié)節(jié)時間較晚期的細(xì)胞出現(xiàn)的早，且在同一誘導(dǎo)時間下形成的礦化結(jié)節(jié)數(shù)量最多、體積最大。茜素紅半定量測定細(xì)胞外基質(zhì)鈣鹽沉積量隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加逐漸降低，3組細(xì)胞代數(shù)中，除了成骨誘導(dǎo)第1周組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外(P＞0.05)，其他各個時段，兩兩組間比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　4、在體外