濾泡性輔助T細胞及濾泡性調節(jié)T細胞在結直腸癌患者外周血中的表達及其臨床意義.pdf

1、背景:結直腸癌是全世界發(fā)病率排名第三的惡性腫瘤，每年有超過100萬患者確診為結直腸癌。傳統治療手段（手術，化療，放療，靶向治療）療效不理想。除了腫瘤本身的機制外，腫瘤微環(huán)境特別是炎癥反應、免疫反應與腫瘤的進展甚至放化療、靶向藥物抵抗有關?？梢哉f，腫瘤免疫治療的時代已經到來。事實上越來越多的證據表明，在預防腫瘤的發(fā)生、生長和轉移擴散中免疫系統扮演重要的角色。
　　對于CD4+T淋巴細胞亞群的研究是近年來免疫學研究的一個熱點。Tfh作

2、為CD4+T淋巴細胞亞群的一種，是近年來研究發(fā)現的一種特殊的輔助性T細胞，表達CXCR5的Tfh細胞在CXCL13的趨化下，被募集到淋巴濾泡，參與誘導B細胞的分化及生發(fā)中心的形成，通過產生IL-21等細胞因子以及表達ICOS等粘附分子來調節(jié)機體的免疫功能。而Tfr細胞作為Tfh細胞的調節(jié)對應物，兼有Tfh和Foxp3+ Treg細胞的表型特征，抑制生發(fā)中心的形成及B細胞的分化，充當與Tfh相反的角色。近來研究表明失調的免疫系統在乳腺癌、

3、非小細胞肺癌和肉瘤的發(fā)生中扮演重要的作用。而關于Tfh和Tfr在結直腸癌患者中表達的研究，國內外尚少有報道。本研究分別采用流式細胞術和酶聯免疫吸附實驗檢測結直腸癌患者和健康人外周血Tfh、Tfr的表達和上清IL-21的含量，并分析其與臨床病理參數的關系，探討其在結直腸癌中表達的意義。
　　目的:檢測Tfh和Tfr在結直腸癌患者和健康對照組人外周血表達水平，同時測定外周血上清IL-21含量。分析Tfh和Tfr與臨床病理參數的關系，探

4、討其在結直腸癌中表達的意義。
　　方法:
　　1、通過流式細胞術檢測實驗組結直腸癌患者和健康對照組人外周血中CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3-Tfh細胞和CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3+Tfr細胞的表達。
　　2、用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)方法，在分子水平檢測實驗組結直腸癌患者和健康對照組人外周血上清IL-21含量。
　　結果:
　　1、研究對象的一般信息和臨床特點
　　實驗組

5、結直腸癌患者共62例，男性34例，女性28例，年齡范圍23～83歲，平均年齡57.6歲，中位年齡58.5歲，病理均證實為腺癌。TNM分期:Ⅰ期7例，Ⅱ期21例，Ⅲ期25例，Ⅳ期9例（肝轉移4例，肺轉移3例，腹腔廣泛轉移1例，腦轉移1例），其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及部分Ⅳ期(4例肝轉移)患者均行手術治療。有淋巴結轉移的32例，無淋巴結轉移的30例。健康對照組共30例，男性6例，女性24例，年齡范圍26～78歲，平均年齡53.2歲，中位年齡54歲。實

6、驗組與健康對照組在年齡、性別、吸煙狀態(tài)等方面相比沒有統計學差異。
　　2、實驗組和對照組外周血中Tfh細胞和Tfr細胞的表達
　　以CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3-作為Tfh細胞的標記，CD4+CXCR5+PD-1+Foxp3+作為Tfr細胞的標記。通過流式細胞術檢測實驗組結直腸癌患者和對照組健康人外周血中Tfh細胞和Tfr細胞的表達。P1門為外周血淋巴細胞，設CD4+T細胞為2門，Q3和Q4分別為外周血中Tfh細

7、胞和Tfr細胞的表達情況。
　　3、實驗組和對照組人外周血Tfh細胞和Tfr細胞的表達
　　實驗組CRC患者外周血Tfh細胞占CD4+T細胞的百分比高于健康對照組（2.93±2.48vs2.09±1.34，P=0.038）;而實驗組CRC患者外周血Tfr細胞低于健康對照組（0.16±0.09vs0.2±0.11，P=0.047）。
　　4、結直腸癌患者外周血Tfh細胞與臨床病理參數的關系
　　有淋巴結轉移者Tfh

8、細胞占CD4+T細胞百分比較無淋巴結轉移者高(2.85±1.5 vs2.20±1.2)。各TNM分期間Tfh細胞占CD4+T細胞百分比相比較，Ⅰ期(1.39±0.64)和Ⅳ期(1.97±0.82)相比較，P=0.04，有統計學差異;而Ⅰ期和Ⅱ期、Ⅲ期相比較及Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期間相互比較P值均大于0.05，沒有統計學差異。比較CRC患者CEA＞5ng/ml和CEA＜5ng/ml兩組間Tfh細胞表達（3.06±2.79vs2.19±2.16，

9、P=0.173），無統計學差異。
　　5、酶聯免疫吸附實驗檢測實驗組結直腸癌患者和健康對照組外周血上清IL-21水平，結果顯示:實驗組結直腸癌患者血清IL-21水平高于健康對照組（196.48±69.85vs149.85±91.49，P＜0.05）。
　　結論:
　　1、結直腸癌患者外周血中Tfh細胞表達量升高，同時伴有Tfr表達量下降，且外周血上清IL-21水平升高。
　　2、Tfh、Tfr細胞可能參與了結直腸