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文檔簡介
1、目的:丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)能夠引起肝臟組織的損傷,從而造成慢性炎癥的發(fā)生,其中一小部分慢性炎癥又會發(fā)展為肝硬化,肝癌。引起慢性HCV感染的其中一個原因就是機體內(nèi)免疫抑制系統(tǒng)的激活,其中有許多免疫抑制細胞發(fā)揮著重要的作用,如調(diào)節(jié)性T細胞(Regulatory Tcell,Treg)。Treg細胞在炎癥部位的積累能夠影響免疫效應細胞對病毒的清除,抑制這些細胞的功能。近年來,大量研究證明了Treg細胞能夠
2、誘導免疫耐受,影響HCV特異性的淋巴細胞的增殖、分化和細胞因子的釋放。本研究主要收集慢性HCV感染的患者外周血,將Treg細胞分為三個亞群,檢測這些患者外周血中Treg細胞及三個亞群的比例以及外切核酸酶CD39、CD73和轉(zhuǎn)化生長因子β(Transforming growth factor β,TGF-β)的表達;同時體內(nèi)和體外實驗檢測抗病毒藥物治療或處理后Treg細胞及三個亞群的比例的變化;最終,本研究還比較了獲得穩(wěn)定病毒學應答(St
3、able virological response,SVR)的患者和未獲得SVR患者外周血中的Treg細胞及其三個亞群的比例,探究Treg細胞是否參與慢性炎癥的發(fā)生。
方法:研究對象主要為慢性丙型肝炎患者,這些患者都在2013年至2015年就診于鄭州大學第一附屬醫(yī)院,其中慢性丙型肝炎患者收集了105例,健康對照收集了40例。收取慢性丙型肝炎患者和健康對照的外周血,密度梯度離心法獲得外周血單個核細胞,并凍存部分細胞于-80℃?zhèn)溆?/p>
4、;流式細胞術檢測外周血中Treg細胞及三個亞群的比例和抑制性分子CD39、CD73和TGF-β的表達,同時流式細胞分選技術分選出純化的Treg細胞;體外加抗病毒藥物處理患者外周血單個核細胞和純化的Treg細胞,流式細胞術檢測Treg細胞的比例變化或抑制性分子CD39、CD73和TGF-β的變化。
結(jié)果:
1.與健康對照相比,慢性HCV患者外周血中總Treg細胞、rTreg細胞和aTreg細胞的比例都有上調(diào)的趨勢,而n
5、on-Treg細胞的比例沒有明顯的變化。
2.慢性HCV感染的患者外周血中aTreg細胞上CD39、CD73和TGF-β表達最高;同時患者外周血中CD4+CD25-T細胞及CD8+T細胞上也表達CD39、CD73和TGF-β。
3.HCV基因型為2a和1b的患者,除了non-Treg細胞在不同的治療階段沒有變化,總Treg、rTreg和nTreg細胞的比例隨著不同治療周期有所變化。
4.體外加藥實驗中,與抗
6、病毒藥物處理前相比,抗病毒藥物處理后總Treg、non-Treg、rTreg、aTreg比例都下降,non-Treg和aTreg細胞分泌TGF-β的量減少;同時體外加藥處理純化的Treg細胞發(fā)現(xiàn)與抗病毒藥物處理前相比,CD73和TGF-β在抗病毒藥物處理后比例下降。
5.與未獲得SVR的慢性HCV患者相比,獲得SVR的慢性HCV患者外周血中non-Treg和rTreg細胞的比例沒有明顯的變化,總Treg和rTreg細胞的比例明
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