兔肺挫傷后XAF1表達(dá)變化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究兔肺挫傷后XA目的表達(dá)變化，探討XAF1在肺挫傷后細(xì)胞凋亡中的作用與意義，為肺挫傷后肺組織細(xì)胞凋亡研究提供新思路，新機(jī)制。
　　 方法：健康成年新西蘭大白兔20只，采用自由落體裝置撞擊兔右胸壁建立肺挫傷動(dòng)物模型，分別于撞擊后6h、24h、48h、72h時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)各取5只作為肺挫傷后6h、24h、48h、72h組；另再取5只正常健康兔不予致傷作為對(duì)照組。各肺挫傷組及對(duì)照組均給予過(guò)量麻醉處死，解剖行大體標(biāo)本觀察，留取肺標(biāo)本

2、：①光學(xué)顯微鏡觀察病理形態(tài)學(xué)變化；②透射電鏡觀察細(xì)胞凋亡類型；③TUNEL法檢測(cè)原位肺組織細(xì)胞凋亡；④RT-PCR檢測(cè)XAF1mRNA表達(dá)變化；⑤免疫組化檢測(cè)XAF1蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 (1)各撞擊組兔均有肺挫傷，以右肺為主且嚴(yán)重，部分合并左肺損傷，但左肺損傷較輕且局限。
　　 (2)光學(xué)顯微鏡觀察肺挫傷后肺損傷明顯，病理學(xué)改變主要表現(xiàn)為彌漫性肺泡內(nèi)出血，部分肺泡破裂，肺間質(zhì)水腫，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。

3、>　　 (3)透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)肺挫傷后肺組織內(nèi)主要為血管內(nèi)皮、肺泡上皮等細(xì)胞凋亡，對(duì)照組則少見(jiàn)。
　　 (4)TUNEL法檢測(cè)肺組織細(xì)胞凋亡情況：對(duì)照組很少有細(xì)胞凋亡(TUEL染色陽(yáng)性細(xì)胞)，肺挫傷后凋亡細(xì)胞顯著增多，主要為肺泡上皮、血管內(nèi)皮、支氣管粘膜上皮細(xì)胞及部分巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞，與電鏡基本吻合，凋亡指數(shù)隨著病程時(shí)間延長(zhǎng)先逐漸增加后下降。與對(duì)照組相比，傷后6h細(xì)胞凋亡指數(shù)即明顯增加，48h達(dá)峰值，稍后下降，72h雖下降但

4、仍明顯高于對(duì)照組(均P<0.05)；與6小時(shí)比較24h、48h、72h細(xì)胞凋亡增加仍有意義(P<0.05)；24h與48h比較無(wú)意義(P>0.05)，但與24h、48h比較72h細(xì)胞凋亡下降有意義(P<0.05)。
　　 (5)XAF1mRNA表達(dá)變化：正常對(duì)照組肺組織有一定量XAF1mRNA表達(dá)，與對(duì)照組比，肺挫傷后各組XAF1mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05)，其先逐漸升高，在6h即升高，24h繼續(xù)增加，48h表達(dá)最強(qiáng)，隨

5、后表達(dá)下降；72小時(shí)表達(dá)降低但仍高于對(duì)照組及傷后6小時(shí)組(P<0.05)，但低于24h及48h時(shí)表達(dá)(P<0.05)；24h和48h組表達(dá)高于6h組(P<0.05)，但24h與48h比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 (6)免疫組化檢測(cè)XAF1蛋白表達(dá)及分布：正常對(duì)照組肺組織有一定量XAF1蛋白表達(dá)，XAF1蛋白主要表達(dá)于支氣管粘膜上皮(幾乎全部粘膜細(xì)胞均呈陽(yáng)性表達(dá)，只有極少數(shù)細(xì)胞不表達(dá)或表達(dá)較弱)，血管內(nèi)皮、肺泡上皮

6、細(xì)胞，部分巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、支氣管及血管平滑肌等間質(zhì)細(xì)胞亦有一部分表達(dá)，以PBS代替一抗則所有細(xì)胞染色完全陰性。肺挫傷后6h XAF1蛋白陽(yáng)性細(xì)胞增加，24h較明顯，48h最多，稍后下降，傷后各組與對(duì)照組比較均有意義(P<0.05)。肺挫傷傷后24h、48h、72h組蛋白陽(yáng)性細(xì)胞均多于6h組(P<0.05)，72h組少于24h和48h組(P<0.05)，但24h組與48h組比較無(wú)顯著差異(P>0.05)。對(duì)照組及肺挫傷各組XAF1蛋白

7、都主要位于細(xì)胞核，未見(jiàn)明確的胞漿染色陽(yáng)性，說(shuō)明肺挫傷誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡未改變XAF1的亞細(xì)胞定位。
　　 結(jié)論：
　　 (1)肺挫傷后肺組織細(xì)胞凋亡過(guò)多，表明細(xì)胞凋亡異常參與了肺挫傷后肺損傷。
　　 (2)XAF1基因及蛋白在正常肺組織有一定量表達(dá)，肺挫傷后表達(dá)升高，說(shuō)明XAF1參與了調(diào)控肺挫傷后細(xì)胞凋亡，從而參與了肺挫傷后肺損傷的病程進(jìn)展。
　　 (3)XAF1在正常及肺挫傷后肺組織都主要表達(dá)于細(xì)胞核，說(shuō)明肺