XAF1基因對胃癌細胞AGS生長的影響及其機制的初步研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學碩士學位論文XAF1基因對胃癌細胞AGS生長的影響及其機制的初步研究姓名：徐迪暉申請學位級別：碩士專業(yè)：內科學（消化系?。┲笇Ы處煟和趵^德;姜泊20060510中文摘要測穩(wěn)定轉染株X A F l 蛋白的表達。將A G S 細胞同步化到S 期后釋放生長，測同步化后0 、2 、4 、6 小時的細胞周期分布及X A F l 蛋白的表達。M T T 法檢測轉染X A F l后對細胞的增殖的影響。流式細胞儀檢測A 6 S ／v e c

2、 t o r ，A G S ／X A F l 細胞的細胞周期。將p D s r e d 2 一N 1 一X A F l 瞬時轉染細胞，免疫細胞化學檢測有絲分裂期表達蛋白- - M P M 一2 磷酸化蛋白的表達，同時檢測穩(wěn)定轉染株中M P M 一2 磷蛋白的表達。用H o e c h s t 2 2 3 5 8 核染色觀察瞬時轉染和穩(wěn)定轉染X A F l 后A G 8 細胞核的形態(tài)變化，用一微管蛋白抗體免疫細胞化學檢測穩(wěn)定轉染株內中心小

3、體的變化。用無血清培養(yǎng)建立凋亡刺激模型，流式細胞儀檢測X A F l 對凋亡刺激的影響，H o e c h s t2 2 3 5 8 核染色觀察凋亡，W e s t e r n b l o t 檢測活性c a s p a s e 一3 表達變化。結果1 ) 建立了穩(wěn)定表達X A F l 的A G S ／X A F l 細胞克?。篧 e s t e r n —b l o t 檢測顯示A G s ／X A F l 細胞的X A F l 表達

4、上調，A G S ／X A F l 一A S 的X A F l 表達下調。2 ) X A F l 是G ：／M 期特異表達蛋白： A G S 細胞同步化到s 期后釋放生長，同步化后2 h 的細胞7 5 ．9 5 ％分布在G ：／M 期、4 h 的細胞7 6 ．4 5 ％分布在G 。／M 期，6 h時段的細胞只有2 1 ．5 6 ％分布在G ：／M 期；同時W e s t e r n 檢測同步化后2 、4 h 的細胞X A F l 蛋白的

5、表達顯著高于0 、6 h 時段。3 ) X A F l 抑制細胞生長：通過M T T 檢測細胞增殖，與對照組相比轉染X A F l后細胞生長被抑制，轉染反義X A F l 則相反。4 ) x A F l 過表達致G 。／M 期阻滯：流式細胞儀檢測A G s ／) 【A F l 細胞中有7 5 ％左右處于G ：／M 期，而A G S ／v e c t o r 細胞中只有3 0 ％處于G 。／M 期。A G S ／X A F l 細胞中M

6、P M 一2 表達陽性占2 7 ．3 ±1 ．3 ％，A G S ／v e c t o r 中占8 ．4 ±O ．5 ％，差異有統(tǒng)計學意義。5 ) X A F l 過表達致有絲分裂障礙：A G S ／X A F l 細胞H o e c h s t 2 2 3 5 8 核染色后觀察，沒有發(fā)現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學特征，有4 6 ．5 ％的細胞出了多倍體核，與有絲分裂障礙的描述一致。并且約2 5 ％的A G S ／X A F