腫瘤抑制基因XAF1在耐藥肺腺癌細(xì)胞中表達(dá)的初步研究.pdf

1、目的：研究腫瘤抑制基因XAF1在耐藥肺腺癌中的表達(dá)，探討XAF1在肺腺癌耐藥發(fā)生、發(fā)展中的作用，為基因治療耐藥肺腺癌提供理論依據(jù)。
　　 方法：本研究培養(yǎng)人非小細(xì)胞肺癌順鉑耐藥細(xì)胞株A549/DDP和其親本株A549，通過MTT法測(cè)定A549/DDP對(duì)順鉑的耐藥指數(shù)；采用半定量逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT．PCR)檢測(cè)兩種細(xì)胞及凋亡細(xì)胞中XAF1、XIAPmRNA的表達(dá)水平變化：利用重組腺病毒Ad5/F35-XAF1介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人肺

2、腺癌順鉑耐藥細(xì)胞株A549/DDP，通過流式細(xì)胞計(jì)量法分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡變化；采用RT-PCR定性檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染后XAF1mRNA表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：(1)A549和A549/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的IC50分別為5.52±0.12μmol/L、34.96±0.74mol/L，因此，A549/DDP對(duì)順鉑的耐藥指數(shù)為34.96/5.52=6.33，確定為耐順鉑的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；(2)RT-PCR結(jié)果顯示A549/D

3、DP細(xì)胞較正常A549細(xì)胞XAF1mRNA表達(dá)水平下調(diào)(P＜0.05)，正常A549細(xì)胞組較順鉑作用48h后的A549細(xì)胞（即凋亡細(xì)胞）XAF1mRNA表達(dá)水平下調(diào)(P＜0.05)；XIAPmRNA的表達(dá)A549/DDP細(xì)胞組明顯高于順鉑作用后的A549細(xì)胞(P＜0.01)，且A549/DDP細(xì)胞組XIAPmRNA的表達(dá)高于正常A549細(xì)胞組(P＜0.05)，正常A549細(xì)胞組XIAPmRNA的表達(dá)高于順鉑作用后的A549細(xì)胞(P＜0.

4、05)；(3)A549/DDP細(xì)胞在經(jīng)重組腺病毒Ad5/F35-XAF1轉(zhuǎn)染后，在安全滴度范圍內(nèi)細(xì)胞的凋亡隨滴度的增加而增強(qiáng)，且XAF1mRNA表達(dá)增強(qiáng)，且隨劑量依賴性增強(qiáng)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 (1)本研究結(jié)果表明，順鉑耐藥肺腺癌細(xì)胞株中腫瘤抑制基因XAF1表達(dá)降低或缺如，XIAP基因表達(dá)明顯增強(qiáng)，XAF1、XIAP作為凋亡相關(guān)基因現(xiàn)已被肯定，XAF1在肺腺癌順鉑耐藥過程的發(fā)生、發(fā)展中可能起一定作用。<

5、br>　　 (2)重組腺病毒Ad5/F35-XAF1及對(duì)照腺病毒Ad5/F35-EGFP，可成功對(duì)肺腺癌順鉑耐藥細(xì)胞株進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，檢測(cè)耐藥肺腺癌細(xì)胞中XAF1mRNA表達(dá)較轉(zhuǎn)染前明顯增強(qiáng)，可見重組腺病毒適用于順鉑耐藥肺腺癌的基因治療。
　　 (3)本研究結(jié)果顯示，采用穩(wěn)定表達(dá)XAF1的腺病毒載體轉(zhuǎn)染順鉑耐藥肺腺癌細(xì)胞，可抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與XAF1恢復(fù)表達(dá)后重新激活了其參與的凋亡通路途徑有關(guān)，說明XAF1