濟(jì)寧青山羊毛囊不同發(fā)育期FGF5基因表達(dá)及毛囊體外培養(yǎng)研究.pdf

1、濟(jì)寧青山羊是我國特有的具有獨特毛色和花形的羔皮和裘皮用山羊品種。為揭示其皮膚毛囊的發(fā)育性變化規(guī)律及其候選基因的差異表達(dá)對皮膚毛囊生長和發(fā)育的影響，本研究采用組織學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)和實時熒光定量PCR等分子細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)，對青山羊不同發(fā)育階段皮膚毛囊的組織結(jié)構(gòu)及其發(fā)育性變化規(guī)律和皮膚組織中成纖維細(xì)胞生長因子5(FGF5)基因的相對表達(dá)量進(jìn)行了比較研究;探討了與山羊毛囊發(fā)育基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制;優(yōu)化了所構(gòu)建的毛囊體外培養(yǎng)體系，探討了類胰島素生長因子-

2、1（IGF-1）和催乳素(PRL)對體外培養(yǎng)毛囊形態(tài)發(fā)育和生長的影響。研究結(jié)果可為山羊毛用性狀的改良提供遺傳數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　經(jīng)過采用組織學(xué)與顯微觀測技術(shù)，比較研究了濟(jì)寧青山羊胎兒（妊娠80-85天）、猾子皮（出生后3天）、羔羊皮（出生后30天）和1齡成年羊皮膚毛囊的組織學(xué)結(jié)構(gòu)，以及成年羊皮膚不同部位的組織學(xué)差異，結(jié)果表明:胎兒羊（妊娠80-85天）胚胎性表皮分化為三層并增厚，在表皮區(qū)可以發(fā)現(xiàn)次級毛囊毛

3、基的發(fā)生;小猾皮毛囊層中的膠原纖維縱橫交錯，與網(wǎng)狀層相比排列較為緊密;猾子皮的毛囊組織間隙較大，密度較稀，初級毛囊發(fā)達(dá)，次級毛囊較少?；悠っ總€毛囊群僅由2-3個初級毛囊和1-2個次級毛囊組成;羔羊皮毛囊層和網(wǎng)狀層明顯增厚，有粗大的膠原纖維束分布其中。
　　以熒光定量PCR技術(shù)，檢測了FGF5 mRNA在不同生長時期青山羊皮膚組織中的差異表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GF5基因的mRNA表達(dá)量有先升高后降低的規(guī)律，在3日齡時達(dá)到最大值，以后逐

4、漸降低，在成年時期又略有回升。結(jié)合不同時期青山羊的毛囊發(fā)育性變化規(guī)律可知，在3日齡即猾子皮時期，毛囊密度和毛囊直徑都較小，皮膚的厚度較薄，此時的FGF5 mRNA的表達(dá)量最高?？梢姡現(xiàn)GF5的表達(dá)量與毛囊數(shù)目和毛囊密度成顯著負(fù)相關(guān)(p＜0.05)，說明FGF5對毛囊發(fā)育密切相關(guān)。
　　對濟(jì)寧青山羊不同發(fā)育階段皮膚中IGF-1的差異表達(dá)進(jìn)行定量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IGF-1在不同發(fā)育時期的皮膚中均有表達(dá)，且在羔羊皮中的表達(dá)量最高;隨著發(fā)

5、育的進(jìn)行，呈現(xiàn)先升后降的趨勢，在2月齡時達(dá)到最大值，之后逐漸下降，但是，到了成年又有一定的提升。
　　在山羊毛囊體外培養(yǎng)的實驗中發(fā)現(xiàn)，在31.5℃培養(yǎng)溫度下，向無血清的Williams E培養(yǎng)基中添加2-10 ng/mL的PRL和IGF-1細(xì)胞因子有促進(jìn)毛囊發(fā)育和毛發(fā)生長的作用。這可能與PRL和IGF-1均具有促進(jìn)細(xì)胞增殖分裂、促進(jìn)毛發(fā)形成、調(diào)控毛囊生長發(fā)育的功能有關(guān)。但是，對于山羊活體皮膚埋植這些細(xì)胞因子或通過增加這些細(xì)胞因子的