濟(jì)寧青山羊性早熟候選基因研究.pdf

1、縮短母羊的初情期，有助于降低后備母羊的生產(chǎn)投入成本。濟(jì)寧青山羊是一個(gè)性早熟、高繁殖力山羊品種。本研究旨在尋找新的與山羊性早熟有關(guān)的基因，了解其作用機(jī)制，期望能夠用于縮短山羊初情期的分子育種。
　　 1.根據(jù)牛UBA52基因序列，設(shè)計(jì)3對(duì)引物(U1～U3)，分別擴(kuò)增隨機(jī)選取的濟(jì)寧青山羊和遼寧絨山羊基因組DNA，PCR產(chǎn)物克隆測(cè)序，序列比對(duì)。結(jié)果顯示僅在U3擴(kuò)增產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)G63A和T181C突變。設(shè)計(jì)引物U4，利用PCR-RFLP技

2、術(shù)分別在性早熟、高繁殖力品種（濟(jì)寧青山羊、南江黃羊、馬頭山羊）和性晚熟、低繁殖力品種（遼寧絨山羊、內(nèi)蒙古絨山羊、太行山羊）中檢測(cè)上述位點(diǎn)的多態(tài)性，并分析2個(gè)突變位點(diǎn)對(duì)山羊性早熟和高繁殖力的影響。對(duì)于G63A位點(diǎn)，在濟(jì)寧青山羊和南江黃羊中檢測(cè)到GG、GA和AA3種基因型，在馬頭山羊、遼寧絨山羊、內(nèi)蒙古絨山羊、太行山羊中只檢測(cè)到GG和GA基因型;該突變位點(diǎn)不同基因型分布在性早熟品種和性晚熟品種間存在一定的差異;濟(jì)寧青山羊GG、GA和AA基因

3、型頻率分別為0.53、0.44、0.03，AA型和GA型母羊平均產(chǎn)羔數(shù)分別比GG型多0.85只(P＜0.05)和0.49只(P＜0.05)，AA型與GA型之間差異不顯著(P＞0.05)。對(duì)于T181C位點(diǎn)，在南江黃羊和內(nèi)蒙古絨山羊中檢測(cè)到CC、CT和TT3種基因型，在濟(jì)寧青山羊、馬頭山羊、遼寧絨山羊、太行山羊中只檢測(cè)到CC和CT兩種基因型;該突變位點(diǎn)不同基因型分布在性早熟品種和性晚熟品種間沒(méi)有明顯差異;濟(jì)寧青山羊CC和CT基因型頻率分別

4、為0.91和0.09，兩種基因型個(gè)體間產(chǎn)羔數(shù)差異不顯著(P＞0.05)。本研究結(jié)果初步表明，UBA52基因63位點(diǎn)與山羊的性早熟可能存在一定關(guān)聯(lián)，A等位基因可能是提高山羊產(chǎn)羔數(shù)的一個(gè)潛在有效的DNA標(biāo)記。
　　 2.根據(jù)牛GDH1基因序列，設(shè)計(jì)7對(duì)引物(P1～P7)，分別擴(kuò)增隨機(jī)選取的濟(jì)寧青山羊和遼寧絨山羊基因組DNA，PCR產(chǎn)物克隆測(cè)序，序列比對(duì)結(jié)果顯示僅在P6的擴(kuò)增產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)A197C突變。設(shè)計(jì)引物P8，利用PCR-RFLP

5、技術(shù)分別在性早熟、高繁殖力品種（濟(jì)寧青山羊、南江黃羊、馬頭山羊）和性晚熟、低繁殖力品種（遼寧絨山羊、內(nèi)蒙古絨山羊、太行山羊）中檢測(cè)上述位點(diǎn)的多態(tài)性，并分析該突變位點(diǎn)對(duì)山羊性早熟和高繁殖力的影響。對(duì)于A197C位點(diǎn)，在南江黃羊中只檢測(cè)到AA和AC基因型，而在其他5個(gè)品種中均檢測(cè)到AA、AC和CC3種基因型;該突變位點(diǎn)不同基因型分布在性早熟品種和性晚熟品種間存在一定的差異;濟(jì)寧青山羊AA、AC和CC基因型頻率分別為0.69、0.26、0.0

6、5，AA型母羊平均產(chǎn)羔數(shù)分別比CC型和AC型分別多0.54只（P＜0.05）和0.3只(P＜0.05)，AC型與CC型之間差異不顯著(P＞0.05)。本研究結(jié)果初步表明，GDH1基因197位點(diǎn)與山羊的性早熟可能存在一定關(guān)聯(lián)，A等位基因可能是提高山羊產(chǎn)羔數(shù)的一個(gè)潛在有效的DNA標(biāo)記。
　　 3.以幼年期Ⅰ(30±5d)、初情期(90±5d)的性早熟品種濟(jì)寧青山羊和幼年期Ⅰ(30±5d)、幼年期Ⅱ(90±5d)和初情期(160～18

7、0d)的性晚熟品種遼寧絨山羊?yàn)檠芯繉?duì)象，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，研究UBA52和GDH1基因在下丘腦、垂體、卵巢、子宮和腎上腺組織中的表達(dá)規(guī)律，探索UBA52和GDH1基因與山羊性早熟的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)UBA52基因在上述各發(fā)育階段5個(gè)組織均表達(dá)，且各發(fā)育階段時(shí)子宮中表達(dá)水平均極顯著高于其他組織（P＜0.01）。濟(jì)寧青山羊垂體中UBA52基因表達(dá)量在初情期時(shí)極顯著低于幼年期（P＜0.01），而遼寧絨山羊UBA52基因表達(dá)量在幼年期Ⅱ時(shí)