N-甲基-D-天冬氨酸2B亞基在慢性內(nèi)臟痛大鼠中樞敏化中的作用.pdf

1、第一章：N-甲基-D-天冬氨酸2B亞基在慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓中樞敏化中的作用
　　 目的：本章節(jié)旨在觀察N-甲基-D-天冬氨酸2B亞基（NR2B）對慢性內(nèi)臟痛大鼠痛覺敏感性的影響并探討其脊髓作用機制，為開發(fā)其治療藥物提供新的作用靶點與思路。
　　 方法：選用新生SD大鼠，出生后8～14d內(nèi)，每天固定時間給予一次60mmHg壓力的結直腸刺激（CI）建立IBS慢性內(nèi)臟痛模型，對照大鼠除了不行CI外，其他情況同模型大鼠。大鼠成年

2、后采用測量腹外斜肌對結直腸擴張的放電反應來評估腸道痛覺的敏感性。鞘內(nèi)分別給予25～150μg Ro 25-6981（NR2B選擇性拮抗劑）或0.1～1.0mg genistein（酪氨酸激酶拮抗劑），觀察其對模型大鼠內(nèi)臟痛敏反應的影響；采用western blot方法觀察比較NR2B及Tyr-1472磷酸化NR2B在模型大鼠脊髓腰骶段的表達情況；并且觀察比較鞘內(nèi)給予上述拮抗劑后是否影響其表達。
　　 結果：
　　 1.慢

3、性內(nèi)臟痛模型大鼠的特點
　　 ①模型大鼠內(nèi)臟痛敏反應顯著高于對照大鼠。②模型大鼠遠端降結腸及直腸局部組織未見明顯病理改變。
　　 2.Ro 25-6981對慢性內(nèi)臟痛大鼠痛覺敏感性的影響
　　 鞘內(nèi)注射Ro 25-6981可劑量依賴性顯著降低慢性內(nèi)臟痛大鼠內(nèi)臟痛敏反應，且最佳作用時間約為給藥后0.5 h。
　　 3.Genistein對慢性內(nèi)臟痛大鼠痛覺敏感性的影響
　　 鞘內(nèi)注射genistei

4、n可劑量依賴性顯著降低慢性內(nèi)臟痛大鼠內(nèi)臟痛敏反應，且最佳作用時間約為給藥后1h。
　　 4.NR2B在慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓中的表達情況
　　 通過western blot的方法觀察結果顯示，NR2B在慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓腰骶段的表達顯著高于正常大鼠；且慢性內(nèi)臟痛大鼠鞘內(nèi)給予高劑量Ro 25-6981后NR2B表達未見明顯改變。
　　 5. Tyr-1472磷酸化NR2B在模型大鼠脊髓中的表達情況
　　 通過w

5、estern blot的方法觀察結果顯示，Tyr-1472磷酸化NR2B在慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓腰骶段的表達顯著高于正常大鼠；且慢性內(nèi)臟痛大鼠鞘內(nèi)給予高劑量Ro 25-6981或genistein后，Tyr-1472磷酸化NR2B的表達均顯著下降。
　　 結論：
　　 NR2B可能是通過激活其酪氨酸1472位點的磷酸化而參與慢性內(nèi)臟痛脊髓中樞敏化的形成，有望成為慢性內(nèi)臟痛藥物治療的新靶點。
　　 第二章：N-甲基-D

6、-天冬氨酸受體2B亞基在慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬場電位LTP中的作用
　　 目的：本章節(jié)旨在觀察海馬場電位長時程增強（LTP）在慢性內(nèi)臟痛大鼠中樞敏化中的作用，及N-甲基-D-天冬氨酸受體2B亞基（NR2B）在其中的作用及機制。
　　 方法：選用新生SD大鼠，出生后8～14d內(nèi)，每天固定時間給予一次60mmHg壓力的結直腸擴張刺激建立IBS慢性內(nèi)臟痛模型，對照大鼠除了不行結直腸擴張刺激外，其他情況同模型大鼠。大鼠成年后通過測量

7、腹外斜肌對結直腸擴張引起的放電反應來評估腸道痛覺的敏感性。采用離體腦片場電位的記錄方法，觀察慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬場電位LTP，并在離體海馬腦片ACSF灌流液中加入0.25～1.0mg/L Ro 25-6981或2.5～10mg/L genistein后，觀察不同濃度Ro 25-6981或genistein對慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬場電位LTP的影響；同時采用western blot方法觀察比較NR2B及Tyr-1472磷酸化NR2B在慢性內(nèi)臟痛

8、大鼠海馬的表達情況。
　　 結果：
　　 1.慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬場電位LTP的變化
　　 慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬場電位LTP峰值及斜率與正常大鼠相比較均顯著增加。
　　 2.Ro 25-6981對慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬場電位LTP的影響
　　 慢性內(nèi)臟痛大鼠離體海馬腦片ACSF灌流液中加入Ro 25-6981可劑量依賴性顯著降低海馬場電位LTP的峰值及斜率。
　　 3.Genistein對慢性內(nèi)臟

9、痛大鼠海馬場電位LTP的影響
　　 慢性內(nèi)臟痛大鼠離體海馬腦片ACSF灌流液中加入genistein可劑量依賴性顯著降低海馬場電位LTP的峰值及斜率；
　　 4.NR2B及Tyr-1472磷酸化NR2B在慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬中的表達情況
　　 通過western blot的方法觀察結果顯示，NR2B及Tyr-1472磷酸化NR2B在慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬的表達與正常大鼠相比較均顯著增加。
　　 結論：