淋巴細胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒GP2單克隆抗體的制備和鑒定.pdf

1、淋巴細胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV)隸屬于沙粒病毒科家族，自然宿主是嚙齒類動物，常見的如家鼠、寵物鼠、倉鼠等都是它的天然攜帶者。它可以通過唾液、鼻分泌物、乳汁、精液、尿液和糞便使病毒得以傳播，也可以通過其它途徑，如皮膚、粘膜傷口、胎盤甚至病毒粒子氣溶膠的形式傳播。宿主感染了LCMV病毒后大都無明顯的癥狀，這就成為了LCMV可以大面積地隱匿性傳播的前提條件。人們很容易低估了LCMV感染的廣泛性。通過對LCMV的研究，人類在諸如T細胞的MH

2、C限制性、CD8+T細胞和CD4+T細胞在清除病毒過程中作用、T細胞耗竭、免疫耐受等方面取得了里程碑式的重大發(fā)現(xiàn)。其中的Armstrong和Cl-13兩個亞型因為基因組的微小差異而引起宿主急慢性感染的巨大差異被眾多實驗室作為模式病毒，深入地研究免疫系統(tǒng)對急慢性感染的病理變化以及對慢性感染的深入研究。目前對LCMV慢性感染的認識也已經(jīng)擴展到了HIV、結(jié)核病、乙肝、丙肝、自身免疫病和腫瘤的領(lǐng)域。而LCMV可以通過多種途徑實現(xiàn)動物-人的傳播。

3、由于人類感染了LCMV病毒通常無明顯癥狀，或者出現(xiàn)輕微的非特異性癥狀而自愈，故導(dǎo)致人們很容易忽視它的存在。而在特定條件下，如妊娠、免疫功能低下或者器官移植時出現(xiàn)機會感染，對人類健康造成極大威脅。GP2是LCMV穿膜蛋白，位于LCMV粒子表面，同GP1共同起修飾病毒表面的作用，同時它在病毒感染宿主細胞時擔(dān)負了通過變構(gòu)而觸發(fā)病毒膜與細胞膜的融合功能。但目前國內(nèi)外實驗室對于LCMV的檢測仍在使用免疫血清或者RT-PCR法，到目前為止暫未出現(xiàn)抗

4、LCMV GP2的單克隆抗體的商品，因此研發(fā)抗LCMV GP2的mAb在科研和臨床有重要的現(xiàn)實意義。
　　目的：
　　本研究的目的是制備針對LCMV GP2的mAb，為開發(fā)酶標或者熒光標記的檢測抗體打下基礎(chǔ)，為以后的免疫治療提供可能;也可以利用該抗體親和純化GP2，從而進一步研究其結(jié)構(gòu)和功能、LCMV疫苗的開發(fā)做好物質(zhì)準備。
　　方法：
　　采用雜交技術(shù)獲得并篩選出雜交瘤細胞，收集含mAb的培養(yǎng)上清行免疫熒光(I

5、FA)、dot-blot、ELISA法鑒定抗體重鏈類型和測定mAb的免疫效價。用蛋白G Sepharose親和層析填料純化抗體，純化后的抗體采用SDS-PAGE檢測純化效果，并進一步用Western-blot檢查抗體對LCMV的作用部位。
　　結(jié)果：
　　成功獲得能穩(wěn)定分泌抗LCMV的特異性雜交瘤細胞株，順利獲得純化的mAb。IFA、dot-blot結(jié)果均證實獲得的mAb能識別LCMV抗原。用ELISA法鑒定出該mAb重鏈類