川芎嗪抗缺血再灌注損傷作用與JNK信號通路的相關性分析.pdf

1、分類號R966學校代號10572UDC610密級學號091100448廣州中醫(yī)藥大學GuangzhouGuangzhouGuangzhouGuangzhouUniversityUniversityUniversityUniversityofofofofChineseChineseChineseChineseMedicineMedicineMedicineMedicine碩士學位論文川芎嗪抗缺血再灌注損傷作用與川芎嗪抗缺血再灌注損傷作用與

2、JNKJNK信號通路的相關性分析信號通路的相關性分析學位申請人王昀指導教師姓名馬武華馬武華專業(yè)名稱麻醉學麻醉學申請學位類型專業(yè)學位專業(yè)學位論文提交日期20122012年5月I摘要研究腦缺血再灌注損傷的機制及防治措施，一直是生命科學研究的重點和熱點，具有重要的醫(yī)學價值。而大量研究表明，腦缺血損傷與絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)級聯(lián)途徑密切相關。而CJun氨基端激酶(JNK)為MAPK家族中的重要成員，已證實JNK傳導通路是導致細胞凋亡的重

3、要信號通路。它在細胞分化、凋亡、應激反應以及多種人類疾病的發(fā)生與發(fā)展中起著重要的作用。臨床中川芎嗪常用于缺血性腦血管疾病及其后遺癥的治療，然而，我們對其作用機制尚有不少爭議。本研究擬在體外原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元細胞的基礎上，探討川芎嗪對缺氧復氧大鼠海馬神經(jīng)元JNK信號通路的影響，試圖通過本研究，從細胞、分子水平上闡明JNK信號通路在神經(jīng)細胞凋亡中的作用，以及川芎嗪腦保護作用機制，為臨床上防治缺血缺氧性疾病提供有效手段和理論依據(jù)。目的：1

4、觀察JNK信號轉(zhuǎn)導通路在缺血再灌注誘導體外培養(yǎng)的神經(jīng)細胞損傷中作用并探討其作用機制。2觀察川芎嗪對缺氧復氧大鼠海馬神經(jīng)元JNK信號轉(zhuǎn)導通路的干預，并探討其作用機理。方法：1.體外培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元，培養(yǎng)第79天，用光學顯微鏡觀察其形態(tài)。2.實驗分組及缺氧復氧模型的建立以培養(yǎng)79天的胎鼠海馬神經(jīng)元為研究對象，隨機分為6組：L組(TMP低濃度組60ugml)，M組（TMP中濃度組200ugml），H組（TMP高濃度組800ugml），C組（

5、對照組0ugml），J組(JNK抑制劑組10molL)，N組（正常組）。除正常組外分別加入相應濃度的川芎嗪或JNK抑制劑，作用1小時后放入90%N210%CO2培養(yǎng)箱中作用2小時誘導缺氧，然后放入5%CO2培養(yǎng)箱中復氧。3.培養(yǎng)79天的胎鼠海馬神經(jīng)元缺氧復氧損傷后，MTT法檢測細胞活力，硝酸還原酶法檢測培養(yǎng)基上清液中NO的含量，免疫印跡法(WesternBlot)檢測蛋白JIP1、Bad、Caspases1的表達。成果：1缺氧復氧損傷后