JNK信號通路參與雌二醇減輕皮瓣缺血再灌注損傷的研究.pdf

1、目的：絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路是廣泛存在于真核細(xì)胞中的重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，可將細(xì)胞外信號逐級放大并傳導(dǎo)到細(xì)胞內(nèi)乃至細(xì)胞核，具有調(diào)控細(xì)胞周期和細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)的作用，參與多種細(xì)胞應(yīng)答及病理變化過程。JNK信號通路是MAPK三大主要信號通路之一，研究提示JNK在生存信號、細(xì)胞死亡、腫瘤及糖尿病等過程均發(fā)揮作用。雌激素是一種天然的內(nèi)分泌激素，對機(jī)體的正常生理功能起重要調(diào)控作用。已有研究發(fā)現(xiàn)雌二醇（雌激素的主要形式）對動物心、腦、肝、

2、腎的缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。我們在先前的實(shí)驗(yàn)中也已發(fā)現(xiàn)，雌二醇可減輕大鼠皮瓣的缺血再灌注損傷，但這種保護(hù)機(jī)制是否與JNK信號通路有關(guān)仍未知。
　　本文通過建立大鼠皮瓣缺血再灌注損傷模型，進(jìn)一步驗(yàn)證雌二醇對皮瓣缺血再灌注損傷的保護(hù)作用；通過測定各組大鼠皮瓣組織中JNK、p-JNK、MKP-5的表達(dá)情況，以闡明JNK信號通路參與雌二醇對皮瓣缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。
　　方法：雄性Wistar大鼠40只，12～14周齡，大鼠

3、飼養(yǎng)及大鼠腹部皮瓣缺血再灌注損傷模型制作均在無特定病原菌級（SPF級）實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。大鼠隨機(jī)分4組，對照組（Ⅰ組）：皮瓣設(shè)計切取，分離皮瓣蒂部血管后原位縫合皮瓣；缺血再灌注組（Ⅱ組）：皮瓣設(shè)計及切取同對照組，蒂部血管分離后用無損傷顯微血管夾夾閉腹壁淺動靜脈，6h后取出血管夾，確認(rèn)腹壁淺動脈血流恢復(fù)，原位縫合皮瓣；雌二醇組（Ⅲ組）：與Ⅱ組相同方法建立皮瓣模型，腹腔注射雌二醇；JNK抑制劑組（Ⅳ組）：與Ⅱ組相同方法建立皮瓣模型，腹腔注射JNK

4、抑制劑SP600125。術(shù)后觀察各組皮瓣一般情況；對皮瓣進(jìn)行攝像，采用Image-Pro Plus.V6.0圖像分析系統(tǒng)計算皮瓣存活率；切取皮瓣組織進(jìn)行組織學(xué)觀察；Western Blot法檢測皮瓣組織中JNK、p-JNK、及絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-5（MKP-5）的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：術(shù)后第7d，Ⅰ組皮瓣大部分存活，少有壞死，皮瓣質(zhì)地柔軟、毛發(fā)生長好；Ⅱ組皮瓣壞死明顯，部分皮瓣存活，存活皮瓣質(zhì)地變硬、毛發(fā)稀疏生長；Ⅲ、Ⅳ組皮

5、瓣壞死面積少，皮瓣毛發(fā)生長良好，存活皮瓣質(zhì)地柔軟。Ⅲ、Ⅳ組皮瓣存活率顯著高于Ⅱ組（P<0.05）。皮瓣組織學(xué)檢查結(jié)果顯示：Ⅰ組皮瓣組織結(jié)構(gòu)正常，未見組織明顯水腫，纖維組織排列整齊，白細(xì)胞少，血管壁完好；Ⅱ組組織結(jié)構(gòu)破壞，水腫明顯，纖維組織連續(xù)性斷裂、排列凌亂，血管壁破壞嚴(yán)重、滲血及炎性細(xì)胞滲出明顯；與Ⅱ組相比，Ⅲ組、Ⅳ組皮瓣組織結(jié)構(gòu)基本保持正常，纖維組織排列整齊，白細(xì)胞浸潤少，血管壁較完好，細(xì)胞變性、壞死現(xiàn)象少見。Western Blo

6、t結(jié)果顯示：缺血再灌注后Ⅱ組JNK的表達(dá)水平較Ⅰ組明顯上調(diào)，而Ⅲ組、Ⅳ組JNK的表達(dá)水平明顯低于Ⅱ組（P＜0.05）。JNK活化形式p-JNK的表達(dá)：Ⅱ組較Ⅰ組高（P＜0.05），Ⅲ組和Ⅳ組p-JNK蛋白水平顯著低于Ⅱ組（P＜0.05）。MKP-5的蛋白表達(dá)水平，四組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。這些結(jié)果提示缺血再灌注可使組織中JNK及p-JNK的表達(dá)上調(diào)，而雌二醇可抑制JNK及p-JNK的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1.雌二