mtDNA(線(xiàn)粒體DNA)與原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥關(guān)系及其氧化損傷機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：
　　1.從反映mtDNA“質(zhì)變”、“量變”的缺失率、拷貝數(shù)著手，探討原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥與mtDNA的相關(guān)性。
　　2.對(duì)骨質(zhì)疏松組與非骨質(zhì)疏松組血清行8-OHdG濃度檢測(cè)，探討血清8-OHdG在兩組患者中的變化情況，以進(jìn)一步證明氧化損傷在骨質(zhì)疏松癥發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　3.進(jìn)一步探討患者mtDNA缺失和拷貝數(shù)變化與8-OHdG的關(guān)系。
　　方法：
　　1.自2011年7月-2012年1月，作者從廣州

2、醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬骨傷科醫(yī)院住院患者中嚴(yán)格按照納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)隨機(jī)選取患者58名，根據(jù)患者的病情需要行骨密度檢測(cè)，并參照骨密度檢查結(jié)果，分為骨質(zhì)疏松組（實(shí)驗(yàn)組）40名與非骨質(zhì)疏松組(對(duì)照組)18名；其中所有患者均行腰椎（L1-4）骨密度檢測(cè)，而同時(shí)行左右股骨骨密度檢測(cè)的患者45名（實(shí)驗(yàn)組27名，對(duì)照組18名）；上述58名患者中行腰椎手術(shù)19例，實(shí)驗(yàn)組10例，對(duì)照組9例；對(duì)上述58名患者、19例手術(shù)患者分別留存外周血

3、、骨組織。
　　2.對(duì)58名患者的外周血、19例手術(shù)患者留存骨組織行普通 PCR定性檢測(cè)4.9kb（4977bp）、3.7kb片段缺失，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)mtDNA拷貝數(shù)。另外對(duì)58名患者的外周血血清Elisa行血清8-OHdG檢測(cè)。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析4.9kb（4977bp）及3.7kb片段缺失、拷貝數(shù)、8-OHdG三個(gè)指標(biāo)之間的相關(guān)性及與其他相應(yīng)參數(shù)的相關(guān)性；并對(duì)原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的獨(dú)立危險(xiǎn)因素進(jìn)行評(píng)估。
　　

4、結(jié)果：
　　1.本研究納入的58名患者，其中實(shí)驗(yàn)組40名，對(duì)照組18名，兩組患者在腰椎（L1-4）BMD、T值均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.01）；其中45名患者（實(shí)驗(yàn)組27名，對(duì)照組18名）行左右股骨骨密度檢測(cè)，兩組患者在左右股骨BMD、T值亦均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.01）；所有患者在年齡、身高、體重、BMI差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p均>0.05）,而在性別上兩組患者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.05）。
　　2.所有患者外周血、19例腰

5、椎手術(shù)患者骨組織中均未發(fā)現(xiàn)mtDNA4.9kb（4977bp）、3.7kb片段缺失。
　　3.采用2-ΔΔCT的計(jì)算法統(tǒng)計(jì)所有患者（58名）mtDNA拷貝數(shù)相對(duì)對(duì)照樣本(選取對(duì)照組中一年齡較大且同時(shí)行腰椎手術(shù)的患者的血樣本作為對(duì)照樣本)的倍數(shù)；Spearman相關(guān)分析示19例腰椎手術(shù)外周血及骨組織mtDNA拷貝數(shù)具有很好的相關(guān)性(r=0.710,p=0.001)；Spearman相關(guān)分析示58名患者外周血 mtDNA拷貝數(shù)與腰椎（

6、L1-4）BMD、T值呈負(fù)性相關(guān)（r=-0.341 p<0.01，r=-0.396 p<0.01）；其中同時(shí)行左右股骨骨密度檢測(cè)的45名患者中，其外周血 mtDNA拷貝數(shù)與左、右股骨 BMD、T值也呈負(fù)性相關(guān)（r=-0.543 p<0.01、r=-0.532 p<0.01；r=-0.483 p<0.01、r=-0.449 p<0.01）；但本組患者中mtDNA拷貝數(shù)與年齡、BMI無(wú)明顯相關(guān)性（p均>0.05）。
　　4. Spea

7、rman相關(guān)分析示58名患者外周血血清8-OHdG濃度與腰椎（L1-4）BMD、T值呈負(fù)性相關(guān)（r=-0.442 p<0.01，r=-0.439 p<0.01）；其中同時(shí)行左右股骨骨密度檢測(cè)的45名患者中，其外周血血清8-OHdG濃度與左、右股骨BMD、T值也呈負(fù)性相關(guān)（r=-0.397 p<0.01，r=-0.458 p<0.01；r=-0.423 p<0.01,r=-0.455 p<0.01）；本組患者中外周血血清8-OHdG濃度與

8、年齡、BMI無(wú)明顯相關(guān)性(p>0.05)，與mtDNA拷貝數(shù)亦無(wú)明顯相關(guān)性(p>0.05)。
　　5.多因素 Logistic回歸分析結(jié)果在校正其他影響因素后，本實(shí)驗(yàn)回歸模型中的性別（女性）、8-OHdG、mtDNA拷貝數(shù)為原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，其中8-OHdG、mtDNA拷貝數(shù)OR分別為3.410（95％CI：1.011-11.504，P=0.048）、33.721（95%CI：2.926-388.600，p=0.00

9、5）。
　　結(jié)論：
　　1.mtDNA4.9kb（4977bp）、3.7kb片段缺失可能與中國(guó)人原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥患病關(guān)系不大。
　　2.患者外周血mtDNA拷貝數(shù)與骨組織mtDNA拷貝數(shù)有顯著相關(guān)性，這在一定程度上說(shuō)明利用外周血mtDNA拷貝數(shù)來(lái)代替骨組織mtDNA拷貝數(shù)進(jìn)行其變異的檢測(cè)的可行性。
　　3.外周血mtDNA拷貝數(shù)與腰椎（L1-4）及左右股骨BMD、T值明顯相關(guān)，這也證明了mtDNA可能參與原發(fā)性骨

10、質(zhì)疏松癥的發(fā)病。
　　4.外周血血清8-OHdG濃度也與腰椎（L1-4）及左右股骨BMD、T值明顯相關(guān)，這說(shuō)明了氧化損傷機(jī)制在原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥發(fā)病中的作用。
　　5.外周血血清8-OHdG濃度與 mtDNA拷貝數(shù)無(wú)明顯相關(guān)性，這在一定程度上說(shuō)明mtDNA氧化損傷可能不是原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥發(fā)病的主要機(jī)制。
　　6.血清8-OHdG、外周血mtDNA拷貝數(shù)是原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，對(duì)原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。